Biotin (also known as vitamin H) oc

Biotin (also known as vitamin H) occurs in all living cells. Although the presence of biotin in biological samples is irrelevant
in many assay systems, it can cause high background when making use of tetrameric biotin-binding proteins (avidin,
streptavidin or Thermo Scientific NeutrAvidin™ Protein) to detect or purify biotin-labeled probes. The following protocol
may be used in immunohistochemical staining, Western blotting or ELISA methods to eliminate background caused by
endogenous biotin by blocking it before adding the biotin-labeled probe.
Two basic steps are involved in this blocking procedure:
1. Bind all endogenous biotin moieties with excess streptavidin (or equivalent biotin-binding protein); wash thoroughly.
2. Block remaining streptavidin biotin-binding sites with free biotin; wash thoroughly.
The second step is necessary because streptavidin, avidin and NeutrAvidin Proteins are tetrameric proteins, having four
biotin-binding sites per molecule. Therefore, the first step in which endogenous biotin is blocked by excess streptavidin must
be followed by a second step in which excess biotin-binding sites on the bound streptavidin are blocked with free biotin. If
this second step were not performed, the blocking streptavidin would undesirably bind the biotin-labeled probe used in the
assay. After the final wash, the result is a sample in which all biotin molecules are bound by streptavidin and all biotinbinding sites on streptavidin are bound by biotin.

結果 (英文) 1:

生物素（也被称为维生素H）发生于所有活细胞。虽然生物样品中生物素的存在是无关紧要的
在许多检测系统，它可以导致高背景时，使用的四聚体的生物素结合蛋白（抗生物素蛋白，
链霉亲和素或热科学neutravidin™蛋白）检测或纯化生物素标记的探针。以下协议
可用于免疫组织化学染色法，蛋白质印迹或酶联免疫吸附试验的方法，以消除背景由
内源性生物素引起的通过阻止它，然后再添加生物素标记探针。参与这个阻塞的程序：
1
两个基本步骤。内源性生物素部分多余的链霉亲和（或等效的生物素结合蛋白）结合，彻底清洗。
2。阻止剩余的游离生物素链霉亲和素生物素结合位点，进行全面清洗。
链霉抗生物素蛋白，抗生物素蛋白和neutravidin蛋白的第二个步骤是必要的，因为是四聚体的蛋白质，具有四个
每分子的生物素结合位点。因此，第一个步骤，在该步骤中，内源性生物素被阻止过量的链霉抗生物素蛋白必须
随后的第二步骤，在该步骤中，过量的生物素结合位点上的结合的链霉抗生物素蛋白与游离的生物素被阻止。如果不进行
该第二步骤中，阻挡的链霉抗生物素蛋白，将不希望的绑定
测定法中所用的生物素标记探针。在最后一次洗涤后，其结果是样品中，所有的生物素分子的链霉亲和素和所有biotinbinding的网站上链霉亲和素生物素的约束的约束。

結果 (英文) 2:

生物素（也被称为维生素H）发生在所有活细胞。虽然生物样品中生物素的存在是不相关的
在许多检测系统，它可以导致高的背景时，利用四聚体的生物素结合蛋白（抗生物素蛋白，链霉抗生物素蛋白或热科学
neutravidin™蛋白）检测或纯化生物素标记的探针。下面的协议
可用于免疫组化染色，免疫印迹和ELISA检测方法消除阻塞之前加入生物素标记探针的
内源性生物素引起的背景。
两个基本步骤都参与了这堵
程序：1。结合所有多余的链霉亲和素的内源性生物素基团（或等效的生物素结合蛋白）；清洗。2。块剩余链霉亲和素生物素结合位点与游离的生物素；彻底清洗。
因为链霉亲和素的第二步是必要的，和素NeutrAvidin蛋白四聚体蛋白，具有四
生物素结合位点/分子。因此，在它的第一步是用过量的内源性生物素链霉亲和素阻断必须
其次是在过量的生物素结合位点结合的链霉抗生物素蛋白与游离的生物素阻断第二步。如果
这第二个步骤没有进行，阻塞的链霉亲和素生物素标记探针将不绑定中使用的
法。在最后的洗涤，结果是一个样本中的所有生物素分子结合的链霉亲和素和所有biotinbinding位点结合生物素链霉亲和素。

結果 (英文) 3:

生物素 (也称为维生素 H) 发生在生活的所有单元格。虽然生物样品中生物素的存在与此无关
在许多检测系统，它可以导致高背景制作时使用的 tetrameric 生物素结合蛋白 (亲，
亲或热科学 NeutrAvidin ™ 蛋白) 检测或净化生物素标记探针。以下协议
可用于在免疫组织化学染色、 免疫印迹或酶联免疫吸附试验方法消除背景造成的
内源性生物素通过添加生物素标记的探针之前阻止它。
两个基本步骤涉及在此过程中阻止：
1。绑定所有内源性生物素偶与过剩亲 （或等效生物素结合蛋白） ；要彻底洗净。
2。阻止其余亲生物素结合位点与免费的生物素 ；要彻底洗净。
第二步是必要的因为亲、 亲和 NeutrAvidin 蛋白是 tetrameric 的蛋白质，有 4 个
每个分子生物素结合位点。因此，第一步中的内源性生物素阻止过量亲必须
跟第二步在上绑定的亲哪过剩生物素结合位点被阻止与游离生物素。如果
未执行第二步，阻塞链霉亲和弊端将绑定中使用的生物素标记探针
测定。在最后的清洗后结果是一个样本中的所有生物素分子受亲和所有 biotinbinding 站点上亲都受生物素。