The PCR reaction requires a pair of short single-stranded oligonucleot的繁體中文翻譯

The PCR reaction requires a pair of

The PCR reaction requires a pair of short single-stranded oligonucleotide primers—usually 15–25 base pairs in length—that are each specific to a short region of sequence onopposing strands of the double-stranded genomic DNA. These primers are used in combinationwith a DNA polymerase (usually Taq polymerase), dNTPs, and reagent buffers to amplify thetarget DNA between and including the two primer target sequences. The target DNA, typically100–2000 bp in length, is copied in an exponential fashion by cycling the reaction mixturethrough a range of temperatures. PCR can have a detection limit of femtograms of DNA andcan, under ideal conditions, detect a single copy of a gene. However, practically the detectionlimits are much higher, ranging from 10 to 104 copies of a gene depending on other reactionvariables. Variables that strongly affect the sensitivity of the PCR include the purity of thetarget DNA, the presence of inhibitors, the specificity of the primers to the target DNA, and theratio of nontarget to target DNA in the sample. Care must be taken in the sample preparationwhich usually includes a lysis step to release the DNA followed by a purification step to removePCR inhibitory compounds. PCR can also be prone to false positives without the adherenceof strict laboratory cleanliness procedures to ensure that the DNA previously amplified in thelaboratory does not contaminate subsequent reactions. Cross-reactivity of the oligonucleotideprimers to nontarget DNA can also be a problem due to the similarity of the DNA sequencebetween closely related strains.
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PCR反應需要一對短的單鏈寡核苷酸的primers- <br>在長度作為每個特定序列的短區域上通常15-25個鹼基對<br>相對的雙鏈基因組DNA的鏈。這些引物組合使用<br>與DNA聚合酶(通常Taq聚合酶),dNTPs和緩衝液的試劑以擴增<br>之間的靶DNA和包含兩個引物的靶序列。靶DNA,典型地<br>在長度100-2000鹼基對,被以指數方式通過循環反應混合物複製<br>通過一個溫度範圍內進行。PCR可以具有DNA和毫微微克的檢測限<br>罐,在理想條件下,檢測的基因的單一拷貝。然而,實際上檢測<br>限高得多,從依賴於其它反應的基因的10至104份<br>的變量。強烈影響PCR的靈敏度變量包括的純度<br>靶DNA,抑製劑的存在,引物與靶DNA的特異性,和<br>非靶的靶DNA在樣品中的比例。必須注意在樣品製備<br>,其通常包括裂解步驟以釋放DNA,隨後純化步驟以除去<br>PCR抑制性化合物。PCR也可以容易誤報,而不遵守<br>嚴格的實驗室清潔程序,確保以前在擴增的DNA <br>實驗室不污染後續反應。寡核苷酸的交叉反應<br>引物對非目標DNA也可能是一個問題,由於DNA序列的相似性<br>密切相關的菌株之間。
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PCR 反應需要一對短的單鏈寡核苷酸引物*<br>通常長度為 15-25 個堿基對,每個堿基對都特定于<br>雙鏈基因組DNA的對立鏈。這些引物是組合使用的<br>用DNA聚合酶(通常是塔克聚合酶)、dNTP和試劑緩衝液來放大<br>目標DNA之間包括兩個引種靶序列。目標DNA,通常<br>100~2000 bp 的長度,通過迴圈反應混合物以指數方式複製<br>通過一系列的溫度。PCR 可以有 DNA 的合成圖的檢測限制,<br>在理想條件下,可以檢測一個基因的單個拷貝。然而,實際上檢測<br>限制要高得多,根據其他反應,基因的10到104個拷貝不等<br>變數。嚴重影響 PCR 靈敏度的變數包括<br>靶向DNA、抑制劑的存在、引種對靶DNA的特異性,以及<br>樣本中非目標DNA與目標DNA的比例。樣品製備時必須小心<br>這通常包括一個解釋步驟釋放DNA,然後一個純化步驟去除<br>PCR抑制化合物。PCR 也可能在沒有依從性的情況下出現誤報<br>嚴格的實驗室清潔程式,以確保DNA以前放大<br>實驗室不會污染後續反應。寡核苷酸的交叉反應<br>由於DNA序列的相似性,非靶向DNA的引種也可能成為一個問題<br>密切相關的菌株之間。
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PCR反應需要一對短的單鏈寡核苷酸引子-<br>通常為15-25個堿基對,每個堿基對都特定於<br>對向的雙鏈基因組DNA。這些底漆是組合使用的<br>用DNA聚合酶(通常是Taq聚合酶)、dNTPs和試劑緩衝液來擴增<br>兩個引子靶序列之間的靶DNA。目標DNA,通常<br>長度為100–2000 bp,通過迴圈反應混合物以指數管道複製<br>通過一系列的溫度。PCR可以檢測到DNA和<br>在理想條件下,可以檢測到一個基因的單一拷貝。然而,實際上<br>限制要高得多,根據其他反應,一個基因的拷貝數從10到104不等<br>變數。强烈影響PCR敏感性的變數包括<br>靶DNA,抑制劑的存在,引子對靶DNA的特异性,以及<br>樣本中非靶DNA與靶DNA的比率。樣品製備時必須小心<br>通常包括一個分解步驟來釋放DNA,然後是一個純化步驟來移除<br>PCR抑制化合物。PCR也容易出現假陽性,而無需依從性<br>嚴格的實驗室清潔程式,確保DNA在<br>實驗室不會污染後續反應。寡核苷酸的交叉反應性<br>由於DNA序列的相似性,非目標DNA的引子也可能是一個問題<br>在密切相關的菌株之間。<br>
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