The movement of single GFP-tagged m

The movement of single GFP-tagged motors was visualized by total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy. Surprisingly, despite the dramatic changes to the neck linker, all of the extended kinesins moved processively, taking >100 steps along the microtubule without dissociating. The average run lengths were similar to wild-type kinesin (WT) (Figures 1B and S2). Even the longest insertion (26P) displayed a run length that was 60% of WT. These findings contrast with the results from prior ATPase studies by Hackney et al. (2003), which suggested that insertions to the neck region severely impair kinesin processivity. Thus, our direct single molecule measurements show that kinesin can maintain its high processivity even after diminishing the mechanical tension between its catalytic domains.

The extended kinesins, however, moved significantly slower than WT. The velocity of the proline insertion constructs decreased progressively with the number of inserted proline residues, with the longer inserts (13P, 19P, and 26P) moving at ∼5-fold lower rates than WT (Figure 1C). The more flexible 14GS insertion resulted in an even greater decrease (10-fold lower than WT). Slow movement of the constructs was not due to impaired ATP hydrolysis, since the maximal MT-stimulated ATP turnover rates (kcat) were similar between WT and the extended kinesins (Figure 1D). This result indicates that the extended kinesins are less efficient in converting ATP hydrolysis energy into productive unidirectional motion. An estimated coupling ratio (Figure 1E) revealed that WT kinesin is at least 80% efficient in converting ATPs hydrolyzed into forward steps, whereas the extended kinesins show a much lower coupling efficiency (as low as ∼10% for the long extended kinesins).

結果 (中文) 1:

单一的GFP标记的电机的运动是可视化的全内反射荧光显微镜（TIRF）。令人惊讶的是，尽管颈部连接器的急剧变化，所有扩展驱动蛋白移动processively> 100步沿微管，无游离。的平均运行长度类似于野生型驱动蛋白（重量）（图1b和s2）中。即使最长的插入（26P）显示的是60％（重量）的游程长度。这些发现与前ATP酶研究的结果由哈克尼等。 （2003年），这表明，它插入到颈部区域严​​重损害动蛋白的合成能力。因此，我们直接单分子的测量结果表明，驱动蛋白能保持其高处理后，甚至削弱了其催化结构域之间的机械张力。

扩展动蛋白，然而，移动明显慢于重量。的速度逐渐下降的插入的脯氨酸残基的数目，与较长的插入的的脯氨酸插入结构（13便士19便士，26P）〜移动率降低5倍，比WT（图1C）。更灵活的14gs插入导致一个更大的减少（比（重量）低10倍）。缓慢运动的结构是不由于ATP水解受损，因为最大MT刺激ATP周转率（kcat值）重量和延长动蛋白（图1D）之间相似。这一结果表明，扩展动蛋白ATP水解的能量转换成生产力的单向运动的效率较低。估计耦合比（图1e中）的显示，驱动蛋白（重量）至少有80％的效率在ATPS转换成前进的步骤水解，而扩展动蛋白耦合效率要低得多（低约10％的长期扩展动蛋白）。

結果 (中文) 2:

运动单GFP标记的汽车是由全内反射荧光显微镜的可视化（TIRF）。令人惊讶的是，尽管颈部链接器的戏剧性的变化，所有的扩展移动processively驱动蛋白，以＞100步骤沿微管没有游离。平均运行长度是与野生型类似驱动蛋白（WT）（图1b和S2）。即使最长的插入（开发）显示运行长度是60%的重量。这些发现与之前的研究从ATP酶的哈克尼等人的结果。（2003），这表明插入颈部严重损害了驱动蛋白前进。因此，我们的直接单分子的测量表明，驱动蛋白甚至可以在减少其催化结构域之间的机械张力保持高速前进。

扩展驱动蛋白，然而，行动比重量的脯氨酸的插入速度与插入的脯氨酸残基的数量逐渐减少显着放缓，插入较长（13P，19P，在∼5倍）和开发比WT低利率（图1C）。更灵活的14gs插入导致更大的减少（比野生型低10倍）。的结构，缓慢的移动是由于受损的ATP的水解，因为最大的机器翻译刺激ATP周转率（KCAT）WT和扩展的驱动蛋白相似（图1D）。这一结果表明，扩展的驱动蛋白将ATP水解的能量转化为生产力的单向运动效率较低。估计的耦合比（图1E）透露，WT驱动蛋白水解成了转换步骤ATPS至少80%的效率，而扩展驱动蛋白表现出较低的耦合效率（如∼10%为长驱动蛋白
低）。

結果 (中文) 3:

绿色荧光蛋白标记的单电机的运动被可视化的全内反射荧光 (提尔夫) 显微。出人意料的，尽管到颈部链接器的戏剧性变化，所有扩展的驱动蛋白移动 processively，考虑 > 100 步沿微管没有避免误入歧途。平均运行的长度是类似于野生型驱动蛋白 (WT) (数字 1B 和 S2)。即使最长的插入 (26 P) 显示有 60%的 WT 的运行的长度。这些调查结果对比与事先 ATPase 研究由 Hackney et （2003 年），其中建议插入到颈部严重损害驱动蛋白 processivity 的结果。因此，我们直接单分子测量显示那驱动蛋白减少机械紧张之间其催化域。 后甚至可以保持其高 processivity

的驱动扩展的蛋白，但是，移动速度明显慢于 WT。脯氨酸插入构造的速度逐步减少与插入的脯氨酸残留物，用较长的插入 (13 P，19 P 的数量和 26 P) 移动 ∼5 折更低的利率比 WT (图 1)。更灵活的 14GS 插入导致更大的减少 (10 倍低于 WT)。缓慢运动的构造不是由于受损的 ATP 水解，因为最大的山刺激 ATP 更替率 (kcat) 是类似 WT 和扩展的驱动蛋白 (图 1) 之间。这一结果表明扩展的驱动蛋白在 ATP 水解能源转化为生产性单向运动的效率较低。估计的耦合比率 (图 1E) 透露 WT 驱动蛋白是至少 80%高效转换水相水解成前进的步骤，而扩展的驱动蛋白显示多较低的耦合效率 （低达 ∼10%，长时间扩展的驱动蛋白）.