To determine whether recombinant NT

To determine whether recombinant NT-3 protein was biologically active, we studied their effects on the neurite outgrowth in human neuroblastoma cells. Primary human neuroblastoma cells were collected and cultured routinely. The attached cells were trypsinized by 0.05% trypsin (Invitrogen) for 10 min, and then the reaction was stopped by adding DMEM (Sigma) and Ham’s F-12 (1:1; Sigma) supplemented with 10% fetal bovine serum (DF-10S; Invitrogen). The suspension was washed twice in serum-free medium and seeded onto 4 plates at a density of 1×104. Then 500 μL medium from the cultures of OEGs transfected with pcDNA3.1(+)-NT3 or pcDNA3.1(+), or OEGs without plasmid transfection, was added to 3 different plates. The rest plate was added with serum-free medium. Three days later, neurite outgrowth was photographed.

結果 (中文) 1:

若要确定是否重组 NT-3 蛋白是生物活性，我们研究及其对神经母细胞瘤细胞突起的影响。主神经母细胞瘤细胞收集并定期培养。附加的单元格被酶的 0.05%胰蛋白酶 (Invitrogen) 10 分钟，然后反应是停止通过添加 DMEM (Sigma) 和火腿的 F-12 (1:1;西格玛） 辅以 10%胎牛血清 (DF-10S ；Invitrogen)。暂停是两次在无血清培养基洗涤和播种，密度为 1 × 104 4 盘子。然后 500 μ L 介质从文化的 OEGs 转染 pcDNA3.1 ()-NT3 或 pcDNA3.1 () 或无质粒转染，OEGs 已添加到不同的 3 片。其余板添加了与无血清培养基。三天后，被拍到突起。

結果 (中文) 2:

以确定重组NT-3蛋白是否具有生物活性，我们研究了其对人神经母细胞瘤细胞中的神经突长出的影响。原代人成神经细胞瘤细胞进行收集和常规培养。附加的细胞通过0.05％胰蛋白酶（Invitrogen公司）10分钟胰蛋白酶消化，然后停止反应，加入DMEM培养基（Sigma）和Ham氏F-12（1:1，Sigma）的补充有10％胎牛血清（DF- 10S; Invitrogen）中。将该悬浮液洗涤两次，在无血清培养基中，并接种到4板以1×104个的密度。然后从OEGs，将pcDNA3.1（+） - 或NT3的pcDNA3.1（+），或OEGs无质粒转染的培养物500微升培养基，加入到3个不同的平板上。其余的板中加入无血清培养基中。三天后，轴突生长被拍到。

結果 (中文) 3:

要确定是否重组NT-3蛋白的生物活性，我们研究了在人类神经母细胞瘤细胞突起生长的影响。主要的人类神经母细胞瘤细胞进行常规培养。所附的细胞用胰蛋白酶消化，用0.05%胰蛋白酶（Invitrogen公司）10分钟，然后加入DMEM反应停（σ）和Ham F-12（1:1；西格玛）补充有10%胎牛血清（df-10s；Invitrogen公司）。悬浮液洗两次在无血清培养和接种到4板的密度为1×104。500μL介质从转染pcDNA3.1 OEGs文化（）和pcDNA3.1（-），NT3或无质粒转染嗅鞘细胞，加入3种不同的板。其余的板中加入无血清培养基。三天之后，神经突起被拍到。