MATERIALS AND METHODSSample collect

MATERIALS AND METHODS
Sample collection. A 500-g garden soil sample was collected from 15 cm below
the surface at Macquarie University, Sydney, New South Wales, Australia, and
was passed through a 2-mm-mesh sieve. The pH (24) and water content (ex-
pressed as a percentage of the dry weight) of the soil sample were determined on
the day of collection to be pH 6.42 and 21%, respectively.
Microcultivation in a soil slurry membrane system. For microcultivation, a
subsample of soil was diluted 1:200 in prefiltered (pore size, 0.2 ?m) distilled
H2O and vortexed for 30 s. This was the bacterial inoculum used for the study.
Sand particles were allowed to sediment for 1 min before 50 ?l of the inoculum
was placed into 10 ml distilled H2O and filtered onto a 0.2-?m, white, isopore PC
* Corresponding author. Mailing address: Department of Biological
Sciences, Division of Environmental and Life Sciences, Macquarie
University, Sydney 2109, NSW, Australia. Phone: [phone]. Fax:
61 2 9850 8253. E-mail: [e-mail].
8714
membrane (Millipore, North Ryde, New South Wales, Australia) using a syringe
filter holder (Sartorius, East Oakleigh, Victoria, Australia). Inoculated PC mem-
branes were then placed on top of a sterile 0.02-?m anopore membrane, which
was fixed within 25-mm TCIs (Nunc A/S, Roskilde, Denmark). Before addition
of the PC membranes, the TCIs were inverted and filled with 3 g of the sieved
garden soil (Fig. 1) that was wetted with 750 ?l of prefiltered distilled H2O. The
soil was gently vortexed until the soil texture was broken down to a muddy soil
slurry. A TCI was then placed upside down in a sterile six-well multidish (Nunc).
The underside of the inoculated PC membrane was then placed on the TCI’s
fixed anopore membrane. The top side of the anopore membrane was also sterile
and served as a barrier between the nonsterile soil slurry and the underside of the
PC membrane, which was also sterile. The culture vessels were incubated at 22°C
in the dark for 7 to 10 days. To confirm sterility, negative control preparations
consisted of uninoculated PC membranes that were placed on top of the TCI
growth support system containing nonsterile soil slurries.

結果 (中文) 1:

材料和方法
样品采集。一个500-G花园土壤样品采自15厘米以下
2毫米目筛通过在麦考瑞大学，悉尼，新南威尔士州，澳大利亚，和
表面。
收集的当天（前
压干重的百分比）的土壤样品的pH值（24）和水含量进行了测定，pH值6.42和21％，分别为。
microcultivati​​on在土壤泥浆膜系统中。
microcultivati​​on子样本土壤稀释1:200预过滤（孔径0.2米）蒸馏水
H2O和涡旋30秒。这是用于研究的细菌接种
沙粒被允许沉积物50的前1分钟到0.2米，白，Isopore表面件放入10毫升蒸馏水中水和过滤升接种

*通讯作者。邮寄地址：生物
科学，环境和生命科学，麦考瑞大学，澳大利亚悉尼，新南威尔士州，2109划分部门。电话：61 2 9850 9252。传真：
61 2 9850 8253。电子邮件：[e-mail]
8714
膜（Millipore公司，North Ryde，新南威尔士州，澳大利亚）使用注射器
滤波器的持有人（缝纫机，奥克利东部，维多利亚州，澳大利亚）。接种件MEM-
膜被放置在无菌的0.02？米anopore膜，定于25毫米TCIS（NUNC A / S，丹麦Roskilde）
。控烟督察的前的pc膜此外
，倒置，充满了3克的筛分的
花园土壤（图1），润湿750升预滤波蒸馏水。
土壤轻轻涡旋，直到土壤质地是细分一条泥泞的土
泥浆。 tci时被颠倒放置在无菌的6孔multidish（NUNC）
tci时
固定anopore的膜，然后放置在接种件膜的底面。顶侧的anopore膜无菌
未经消毒的土壤泥浆和底面之间的屏障担任
PC膜，这也是无菌的。培养容器培养，在22°C
7至10天，在黑暗中。确认无菌，包括阴性对照制剂
tci时
生长支持系统含有非无菌土壤泥浆放置在顶部的未接种的PC膜。

結果 (中文) 2:

材料与方法
样品采集。一个500克的花园土壤样品是从15厘米以下的表面
收集麦克里大学，悉尼，新南威尔士，澳大利亚，和
通过一2-mm-mesh筛。pH（24）和水含量（前
按干重的百分比）的土壤样品，测定
收藏的一天是pH值为6.42和21%，分别。
在土壤泥浆膜系统microcultivation。为microcultivation，一
样本的土壤稀释1:200预滤波（孔径，0.2？m）蒸馏
H2O和涡旋30这是用于研究细菌的接种。
砂颗粒被允许沉积的前1分钟的50？我的接种
放入10毫升蒸馏水和过滤到一个0.2-？M，白色，PC
等值线*通讯作者。邮寄地址：生物
科学系，环境与生命科学部门，麦格理
大学，悉尼2109，新南威尔士，澳大利亚。电话：61 2 9850 9252。传真：
61 2 9850 8253。电子邮件：bferrari @ RNA。生物。MQ。教育。金。
8714
膜（微孔，北莱德，新南威尔士，澳大利亚）使用注射器
过滤器（缝纫机，东奥克利，维多利亚，澳大利亚）。接种PC存储器
膜被放置在一个无菌0.02-？米无机膜，它
被固定在25毫米的国际学校（现在的A / S，罗斯基勒，丹麦）。在PC膜的同时
，TCIS倒满3克的筛
园土（图1），750是湿的？我的
预蒸馏水。土壤是轻轻的涡旋直到土壤质地坏了一个泥泞的土
浆。TCI然后颠倒放置在无菌六井multidish（西面）。
的接种PC膜下面再放在TCI的
固定无机膜。对无机膜的顶侧进行无菌
并担任无菌土浆的
底面之间的屏障PC膜，这也是不育。培养器皿孵育22°C
在黑暗中7到10天。确认不育，阴性对照制剂
包括未接种PC膜被放置在顶部的TCI
成长支持体系含有无菌土。

結果 (中文) 3:

材料和方法
样品采集。从 15 厘米以下收集 500 g 花园土壤样本
麦格理大学，悉尼，新南威尔士州和澳大利亚，在表面和
通过 2 毫米的筛网。Ph 值 (24) 和水含量 (前-
按干重的百分比) 土壤样品的确定上
要将 ph 值集合的天 6.42 和 21%，分别。
在土壤泥浆膜系统中的 Microcultivation。为 microcultivation，
次级抽样的土壤是稀释 1: 200 中且预先过滤 （孔隙的大小，0.2? m) 蒸馏水
H2O 和 vortexed 为 30 s。这是细菌菌剂用于研究。
沙粒被允许泥沙 1 分钟前 50? l 的菌剂
被放入 10 毫升蒸馏水 H2O 和筛选到 0.2-? m，白色，isopore PC
* 相应的作者。邮寄地址: 生物学系
科学、 司的环境和生命科学，麦格理
大学、 2109、 新南威尔士州，澳大利亚悉尼。电话： 61 2 9850 9252。传真：
61 2 9850 8253。电子邮件: [e-mail].
8714
membrane (米利波尔、 北莱德、 新南威尔士州、 澳大利亚） 使用注射器
滤网固定架 （匠，东奥克利，维多利亚，澳大利亚)。接种 PC mem-
片膜然后被放置在无菌的 0.02-? m anopore 膜，其中
固定在 25 毫米 TCIs 丹麦罗斯基勒，此地 a/S） 内。另外前
PC 薄膜，TCIs 被倒置，充满 3 g 的被筛
花园是 750 用沾湿的土壤 (图 1)? prefiltered 蒸馏水 H2O l。
土壤是轻轻地 vortexed，直到土壤质地是分解为淤泥质土
浆。特克斯和凯科斯群岛在不育的六井 multidish (此地) 然后颠倒放置.
接种 PC 膜的底面然后放在特克斯和凯科斯群岛的
固定 anopore 膜。顶边的 anopore 膜也是不育
和担任染菌土浆和的底面之间的障碍
PC 膜，也是不育。文化船只在 22 ° C 孵育
在 7 到 10 天的黑暗中。要确认不育，消极控制筹备
组成的画面被放置在特克斯和凯科斯群岛的 PC 膜
包含染菌土壤泥浆的增长的支持系统。