The annealing temperature and conce

The annealing temperature and concentrations of each primer pairs were optimized to ensure proper amplification efficiency for each amplicon. The annealing temperature for the multiplex PCR assay was optimized at 56 C because each specific PCR fragment could be produced at this temperature. Moreover, the concentrations of four pairs of primers were further optimized using an orthogonal experimental design (Supporting Information Table S1).The optimum concentrations of primers were: 0.32 mM for ompA primers, 0.48 mM for nuc primers, 0.48 mM for nheA primers, and 0.08 mM for 16S rRNA primers. The products of the mPCR were evaluated in a 1.5% agarose gel, and amplified fragments of 380 bp for C. sakazakii, 297 bp for S. aureus, 617 bp for B. cereus, 475 bp for IAC were obtained (Fig 1). These results showed only specific bands which indicated that the mPCR assay could detect the individual as well as the three bacteria in the same reaction.

結果 (繁體中文) 1:

退火溫度和濃度的每個引物對被優化，以確保每個擴增子的適當的擴增效率。因為每個特異的 PCR 片段可能產生在此溫度下，退火溫度為多重 pcr 56 ℃ 進行了優化。此外，4 對引物的濃度進行了進一步優化使用正交實驗設計 (支援資訊表 S1)。引物的最佳濃度︰ 0.32 毫米歐帕底漆、 校正引為 0.48 毫米、 0.48 毫米 nheA 底漆和 16S 核糖體 Rna 引物為 0.08 毫米。產品的反應在 1.5%瓊脂糖凝膠進行了評價和擴增片段的 380 C.阪崎腸桿菌，297 bp bp 為金黃色葡萄球菌，617 芽孢，475 bp bp 為 IAC 得到了 (圖 1)。這些結果表明只有特異性的條帶，表明反應測定可以檢測個人以及三種細菌，在同樣的反應。

結果 (繁體中文) 2:

退火溫度和每一引物對的濃度進行了優化，以確保對每個擴增子正確擴增效率。退火溫度為多重PCR測定在56℃優化，因為每一具體的PCR片段可能在此溫度下進行生產。此外，4對引物濃度採用正交試驗設計（支持信息表S1）引物.The最佳濃度分別為進一步優化：0.32毫米的ompA引物，0.48毫米NUC引物，0.48毫米nheA引物，和0.08毫米的16S rRNA引物。在多重PCR的產物在1.5％瓊脂糖凝膠進行了評價，並擴增380 bp的為C.阪崎腸桿菌，297鹼基對金黃色葡萄球菌，617鹼基對蠟狀芽孢桿菌，得到475 bp的為IAC（圖1）的片段。這些結果表明，僅說明該多重PCR測定能夠檢測個體以及在相同的反應的三種細菌特異性條帶。

結果 (繁體中文) 3:

優化保證每個擴增子的擴增效率進行適當的退火溫度和每對引子的濃度。的多重PCR檢測的退火溫度進行了優化，在56 C，因為每個特定的PCR片段可以在這個溫度下產生。此外，四對引子的濃度進行了進一步優化，採用正交試驗設計（支持信息表），引子的最佳濃度分別為：0.32毫米0.48毫米的NUC OmpA引子，引子，0.48毫米和0.08毫米nheA引子對16S rRNA基因的引子。的多重PCR產品在1.5%的瓊脂糖凝膠進行評估，並擴增片段的380 bp的C.阪崎腸桿菌、金黃色葡萄球菌297 bp，617 bp的B. cereus，得到475 bp的IAC（圖1）。這些結果表明只有特异性條帶，表明MPCR檢測個人以及在同一反應三細菌。