Fifty micro liters of CZ1127 fucoid

Fifty micro liters of CZ1127 fucoidanase solution containing 20 mM Tris–HCl (pH 7.2) was mixed with 50 mL 0.4% fucoidan solution in the same buffer and 0.8 M NaCl. This mixture was incubated at 25 °C for 8 h and thereafter heated at 100 °C for 10 min. After centrifugation, the supernatant was desalted by non-por-ous graphitised carbon black column as previously reported (Packer, Lawson, Jardine, & Redmond, 1998). In brief, oligosaccharide solutions were applied to a Carbograph SPE column (SUPELCO, USA). Salts were washed with approximately three column volumes of water. The oligosaccharides were adsorbed and then eluted with 25% (v/v) acetonitrile in 0.05% (v/v) TFA, which was collected, concentrated and lyophilised.
2.3. Determination of oligosaccharide profile by LC–MS
The oligosaccharide profile was determined by high performance liquid chromatography (Aglient 1260, Aglient Technologies,USA) coupled with triple quadrupole mass spectrometry (Aglient
6400, Aglient Technologies, USA) according to the modified method of Alvarez-Manilla et al. (2006). The desalted oligosaccharide mixture was subjected to size exclusion chromatography (SEC) using a Superdex Peptide column (GE Healthcare, USA) eluted at a flow rate of 0.5 mL/min with 25% (v/v) acetonitrile containing 50 mM ammonium formate. Parameters for the MS were as follows: gas temperature 350 °C; gas flow, 11 L/min; nebuliser pressure, 50 psi; capillary voltage, 4000 V; fragmentor voltage, 135 V; scanned mass, 100–2000 Da. The data acquisition for MS signals was made using Chemstation software (B.04.00 [B4038], Aglient Technologies, USA) and the distribution coefficient of oligosaccharide, i, on Superdex Peptide column was calculated according to the following equation:

結果 (中文) 1:

五十微公升的含有 20 毫米的 CZ1127 藻溶液与 50 毫升 0.4%褐藻糖胶溶液在相同的缓冲区和 0.8 M 氯化钠混合三 — — 盐酸 （pH 7.2）。这种混合物是孵化在 25 ° C 为 8 小时，此后加热 10 分钟，100 ℃。离心后上清液被淡化按非 por ou graphitised 炭黑列如以前所报告 (封隔器、 劳森、 怡和，雷德蒙德，1998年)。简单地说，低聚糖的解决方案适用于 Carbograph SPE 柱 (其中的水蒸气、 USA)。盐被用大约三个柱体积的水冲走。低聚糖被吸附，然后用在 0.05%（v/v） 反式脂肪酸，这是收集、 集中和冻干的 25%（v/v） 乙腈洗脱。2.3.低聚糖形由液相色谱 — — 质谱法测定低聚糖形测定高性能液相色谱法 （安捷伦 1260、 安捷伦科技、 美国） 三重四极杆质谱 （安捷伦6400、 安捷伦科技、 美国) 修改方法的阿尔瓦雷斯马尼拉等人 （2006 年）。除盐水低聚糖混合物受到尺寸排阻色谱法 （SEC） 使用 Superdex 多肽洗脱 GE 医疗集团美国） 在 0.5 毫升/分钟的流速与 25%（v/v） 乙腈含甲酸铵 50 毫米。MS 的参数如下： 气体温度 350 ° C;气体流量，11 L/min ；雾化器压力，50 磅/平方英寸 ；毛细管电压、 4000 V;fragmentor 电压、 135 V;扫描质量，100-2000 Da。MS 信号数据采集采用 Chemstation 软件美国安捷伦科技 B.04.00 [B4038]） 和低聚糖、 多肽 Superdex 列上分布系数按照下列公式计算：

結果 (中文) 3:

含20 mM Tris HCl溶液–海参岩藻多糖五十微升（pH值7.2）混合，用50毫升0.4%的褐藻糖胶溶液在相同的缓冲液和0.8 M NaCl。该混合物培养25°C 8小时，然后加热100°C 10分钟离心后，上清液淡化非空隙性石墨化炭黑柱如先前报道（封隔器，劳森，怡和，&雷德蒙德，1998）。总之，寡糖的解决方案被应用于一个Carbograph固相萃取柱（Supelco公司，美国）。盐与水约三的柱体积洗。低聚糖进行吸附，然后用25%（v/v）乙腈0.05%（v/v）TFA，这是收集，浓缩，冷冻干燥。
2.3。LC–MS
测定寡糖亲fi乐寡糖的亲fi乐采用高效液相色谱法测定（在1260，在技术，美国）三重四极杆质谱联用法（在
6400，在技术，美国）根据穆迪fiED方法阿尔瓦雷斯马尼拉等人。（2006）。脱盐寡糖的混合物进行尺寸排除色谱（SEC）用Superdex肽柱（GE Healthcare，USA）洗脱在25% 0.5毫升/分钟的流速（V / V）含50 mM甲酸铵乙腈。MS的参数如下：气体温度350°C；气体流量，11升/分钟；雾化压力，50磅；毛细管电压，4000 V；碰撞诱导解离电压，135 V；扫描质量，100–2000大。MS信号的数据采集是利用工作站软件（b.04.00 [ b4038 ]，在技术，美国）和分配系数的有效fi寡糖，我，上柱Superdex肽按下列公式计算：