3.3. Involvement of Smurf1 in Nrf2-

3.3. Involvement of Smurf1 in Nrf2-mediated Smad7 elevationObtained results showed that protein levels of Smad7 were upregulated without the elevation in transcript levels in shKeap1 cells. In our previous study, we identified that Smurf1 protein was differentially expressed in Keap1 knockdown human renal tubular epithelial cells [39]. In this context, we investigated the presence of negative feedback regulation of Smurf1 and Smad7 in Keap1 knockdown mesangial cells. As shown in Fig. 3A, protein levels of Smurf1, an E3 ubiquitin ligase for Smad7 degradation, were significantly decreased in shKeap1 cells, whereas Smurf2 levels were not affected by Keap1 deletion. In addition, decrease in Smurf1 mRNA levels was confirmed in shKeap1 cells (Fig. 3B). Smurf1 level was found to marginally elevated by TGF-β1 treatment, which is accompanied by Smad7 elevation (Fig. 3C). This suggests that Smurf1 level is also dependent on TGF-β1 signaling in our cell system. Unfortunately, the cause of Smurf1 changes in shKeap1 cells has not yet been identified; however, we observed that the protein levels of Smad7 were increased by si-Smurf1 transfection in the control MES-13 cells, indicating the direct link between Smurf1 and Smad7 reduction (Fig. 3D). In line with this, overexpression of Smurf1 in shKeap1 cells repressed Smad7 levels to that of the control cells (Fig. 3E). These observations indicate that the Nrf2 pathway leads to Smad7 elevation through Smurf1 reduction in MES-13 cells.

結果 (繁體中文) 1:

3.3。在Nrf2的介導Smad7的海拔Smurf1的參與
得到的結果表明，Smad7蛋白的蛋白水平，而不在shKeap1細胞轉錄水平升高上調。在我們以前的研究中，我們確定了Smurf1蛋白在Keap1的差異表達擊倒人腎小管上皮細胞[39]。在此背景下，我們研究了Keap1的敲除腎小球系膜細胞Smurf1和Smad7的負反饋調節的存在。如圖3A所示，Smurf1的蛋白水平，E3泛素連接酶為Smad7的降解，在shKeap1細胞顯著降低，而SMURF2水平不受Keap1的缺失。此外，降低Smurf1 mRNA水平被證實在shKeap1細胞（圖3B）。Smurf1水平被發現輕微由TGF-β1處理，這是伴隨著Smad7的高程（圖3C）升高。這表明Smurf1水平也依賴於我們的電池系統TGF-β1信號。不幸的是，Smurf1的原因改變shKeap1細胞尚未確定; 然而，我們觀察到Smad7的蛋白水平分別提高了在控制MES-13細胞SI-Smurf1轉染，表明Smurf1和Smad7的減少（圖3D）之間的直接鏈路。與此一致，在shKeap1細胞Smurf1的過表達抑制Smad7的水平與對照細胞（圖3E）的。這些觀察結果表明，通過MES-13細胞Smurf1減少的Nrf2途徑導致Smad7的高度。我們觀察到，Smad7的蛋白水平分別提高了在控制MES-13細胞SI-Smurf1轉染，表明Smurf1和Smad7的減少（圖3D）之間的直接鏈路。與此一致，在shKeap1細胞Smurf1的過表達抑制Smad7的水平與對照細胞（圖3E）的。這些觀察結果表明，通過MES-13細胞Smurf1減少的Nrf2途徑導致Smad7的高度。我們觀察到，Smad7的蛋白水平分別提高了在控制MES-13細胞SI-Smurf1轉染，表明Smurf1和Smad7的減少（圖3D）之間的直接鏈路。與此一致，在shKeap1細胞Smurf1的過表達抑制Smad7的水平與對照細胞（圖3E）的。這些觀察結果表明，通過MES-13細胞Smurf1減少的Nrf2途徑導致Smad7的高度。

結果 (繁體中文) 2:

3.3. 藍精靈1參與Nrf2介導的Smad7高程
結果表明，Smad7的蛋白質水準在shKeap1細胞中無轉錄水準升高。在以前的研究中，我們發現Smurf1蛋白在Keap1敲除人類腎管狀上皮細胞中表達不同[39]。在此背景下，我們調查了在Keap1敲除模因細胞中藍精靈1和Smad7存在負反饋調節。如圖3A所示，Smurf1的蛋白質水準，一種用於Smad7降解的E3泛性聯苯，在shKeap1細胞中顯著降低，而藍精靈2水準不受Keap1刪除的影響。此外，在shKeap1細胞中確認藍精靈1mRNA水準下降（圖3B）。Smurf1水準被TGF-+1治療發現略有升高，並伴有Smad7升高（圖3C）。這表明藍精靈1水準也依賴于TGF-+1信號在我們的細胞系統中。不幸的是，smurf1在shKeap1細胞的變化的原因尚未確定;然而，我們觀察到Smad7的蛋白質水準通過控制MES-13細胞中的si-Smurf1轉染而增加，表明藍精靈1和Smad7減少之間的直接聯繫（圖3D）。因此，shKeap1細胞中藍精靈1的過度表達將Smad7水準抑制到對照細胞的水準（圖3E）。這些觀察表明，Nrf2通路通過MES-13細胞中的藍精靈1減少導致Smad7高程。

結果 (繁體中文) 3:

3.3條。藍精靈1參與Nrf2介導的Smad7升高
結果表明，在shKeap1細胞中，Smad7蛋白水准上調，而轉錄水准沒有升高。在我們之前的研究中，我們發現藍精靈1蛋白在Keap1基因敲除的人腎小管上皮細胞中有差异表達[39]。在此背景下，我們研究了Keap1基因敲除系膜細胞中Smurf1和Smad7的負反饋調節。如圖3A所示，shKeap1細胞中Smurf1（一種用於Smad7降解的E3泛素連接酶）的蛋白質水准顯著降低，而Smurf2的水准不受Keap1缺失的影響。此外，在shKeap1細胞中證實藍精靈1的mRNA水准下降（圖3B）。TGF-β1治療後，Smurf1水准略有升高，伴有Smad7升高（圖3C）。這表明藍精靈1的水准也依賴於細胞系統中的TGF-β1訊號。不幸的是，shKeap1細胞中Smurf1變化的原因尚未確定；然而，我們觀察到，通過在對照MES-13細胞中轉染si-Smurf1，Smad7蛋白水准新增，表明Smurf1和Smad7减少之間存在直接聯系（圖3D）。與此一致，shKeap1細胞中Smurf1的過度表達將Smad7水准抑制到對照細胞的水准（圖3E）。這些觀察結果表明，Nrf2通路通過MES-13細胞中Smurf1的减少導致Smad7的升高。