A. DescriptionThe pET System is the

A. Description
The pET System is the most powerful system yet developed for the cloning and expression of
recombinant proteins in E. coli. Target genes are cloned in pET plasmids under control of strong
bacteriophage T7 transcription and (optionally) translation signals; expression is induced by
providing a source of T7 RNA polymerase in the host cell. T7 RNA polymerase is so selective and
active that, when fully induced, almost all of the cell’s resources are converted to target gene
expression; the desired product can comprise more than 50% of the total cell protein a few hours
after induction. Although this system is extremely powerful, it is also possible to attenuate
expression levels simply by lowering the concentration of inducer. Decreasing the expression
level may enhance the soluble yield of some target proteins. Another important benefit of this
system is its ability to maintain target genes transcriptionally silent in the uninduced state.
Target genes are initially cloned using hosts that do not contain the T7 RNA polymerase gene,
thus eliminating plasmid instability due to the production of proteins potentially toxic to the host
cell (see Section I. F. for details). Once established in a non-expression host, target protein
expression may be initiated either by infecting the host with λCE6, a phage that carries the T7
RNA polymerase gene under the control of the λ pL and pI
promoters, or by transferring the
plasmid into an expression host containing a chromosomal copy of the T7 RNA polymerase gene
under lacUV5 control. In the second case, expression is induced by the addition of IPTG to the
bacterial culture. Although in some cases (e.g., with innocuous target proteins) it may be
possible to clone directly into expression hosts, this approach is not recommended as a general
strategy. Two types of T7 promoter and several hosts that differ in their stringency of
suppressing basal expression levels are available, providing great flexibility and the ability to
optimize the expression of a wide variety of target genes.

結果 (繁體中文) 1:

A.說明寵物系統是最強大的系統尚未開發的克隆與表達在大腸桿菌中的重組蛋白。靶基因被克隆在寵物質粒控制的強噬菌體 T7 轉錄和翻譯信號; （可選）通過誘導表達提供的 T7 RNA 聚合酶的宿主細胞的來源。T7 RNA 聚合酶是如此選擇性和積極，當完全誘導，幾乎所有的儲存格的資源將轉換為目標基因表達;所需的產品可以占總蛋白的 50%以上幾個小時後感應。雖然這個系統是非常強大的它也是可能減輕只需通過降低誘導劑濃度的表達水準。降低的表達水準可以提高一些靶蛋白的可溶性的產量。另一個重要的好處系統是其能夠維持靶基因轉錄沉默處於測試狀態。靶基因最初是使用主機不包含 T7 RNA 聚合酶基因，克隆從而消除由於蛋白質到主機有潛在毒性的生產質粒不穩定細胞 （見第一節 F.詳細資訊）。一旦建立非表達宿主中，目標蛋白運算式可能發起要麼通過感染 λCE6，攜帶 T7 噬菌體與宿主Rna 聚合酶基因控制的 λ pL 和 pI贊助者，或由轉移質粒進入含有 T7 RNA 聚合酶基因染色體複製運算式宿主lacUV5 在控制下。在第二種情況下，運算式誘導到 IPTG 的加法細菌培養。雖然它可能是在某些情況下 （例如，與無害化目標蛋白質）可能直接進入運算式宿主克隆，這種做法不是推薦作為一般戰略。兩種類型的 T7 啟動子和在其嚴格程度不同的多個主機抑制基礎資料表達水準是可用的提供極大的靈活性和能力優化的種類繁多的靶基因的表達。

結果 (繁體中文) 2:

A.說明
寵物系統是用於克隆和表達尚未開發的最強大的系統
在大腸桿菌中的重組蛋白。靶基因是根據強控制在克隆pET載體
T7噬菌體轉錄和翻譯（可選擇）信號; 表達是由誘導
宿主細胞提供T7 RNA聚合酶的來源。T7 RNA聚合酶是如此的選擇性和
活性，當充分誘導，幾乎所有的細胞的資源的被轉換為靶基因
的表達; 所需產物可以在幾小時構成總細胞蛋白質的50％以上的
誘導後。儘管該系統是極其強大的，也有可能來衰減
通過降低誘導子的濃度簡單地表達水平。降低的表達
水平可以提高某些靶蛋白的可溶產量。此的另一個重要優點
系統是其保持的靶基因在非誘導狀態轉錄沉默的能力。
靶基因所使用不包含T7 RNA聚合酶基因的主機起初克隆，
從而消除了質粒的不穩定性，由於生產蛋白質具有潛在毒性的宿主
細胞（見IF詳情）。一旦在非表達宿主成立，目標蛋白質
的表達可以由感染與λCE6，攜帶T7噬菌體主機發起
的λPL及電點的控制下，RNA聚合酶基因
啟動子，或通過轉印
質粒成含有T7 RNA聚合酶基因的染色體拷貝表達宿主
lacUV5啟動控制之下。在第二種情況下，表達通過加入IPTG至誘導
細菌培養。雖然在某些情況 ​​下（例如無毒目的蛋白），可能
可以直接克隆到表達宿主，這種做法是不推薦的常規
策略。兩種類型的T7啟動子和多個主機的，在他們的嚴格性不同
抑制基礎表達水平是可用的，從而提供很大的靈活性和能力
優化的各種各樣的靶基因的表達。

結果 (繁體中文) 3:

A.描述寵物系統是最强大的系統，但發展的尅隆和表達大腸桿菌的重組蛋白。在强質粒的控制下，將目標基因克隆在質粒中噬菌體T7轉錄和翻譯訊號（可選）；誘導表達提供T7 RNA聚合酶在宿主細胞來源。T7 RNA聚合酶是選擇性的，活躍，當充分誘導，幾乎所有的細胞的資源轉化為目標基因表達；所需的產品可以包括超過50%的總細胞蛋白的幾個小時誘導後。雖然這個系統是非常强大的，它也有可能衰减簡單通過降低誘導劑的濃度的表達水准。降低表達水准可提高某些靶蛋白的可溶性產量。這的另一個重要好處系統是其維持靶基因轉錄沉默在非誘導狀態的能力。靶基因的初步尅隆使用主機不含有T7 RNA聚合酶的基因，囙此，消除質粒不穩定，由於生產的蛋白質潜在的毒性的主機細胞（見第I部分細節）。一旦建立在一個非表達宿主，目標蛋白表達既可由主機與λCE6感染引發，一個帶有T7噬菌體RNA聚合酶基因的λPL和PI控制下的發起人，或通過轉讓質粒轉化表達宿主含有T7 RNA聚合酶基因的染色體複製lacUV5控制下。在第二種情况下，表達用IPTG誘導的新增細菌培養。雖然在某些情况下（例如，與無害的目標蛋白），它可能是可能直接尅隆到表達宿主，這種方法不被推薦為一般策略。兩種T7啟動子和多個主機在其嚴格的不同抑制基礎表達水准是可用的，提供了很大的靈活性和能力優化多種靶基因的表達。