All columns were sectioned for biom

All columns were sectioned for biomass analysis on day 300
when column operation ceased. The following segments as
measured from the column inlet were removed and transferred
aseptically to sterile 15 mL polypropylene tubes (BD
Falcon, Franklin Lakes, NJ): 0e2, 2e3, 11e13, 18e20, 27e28,
28e30 cm. Samples were stored at 80 C until further analysis.
After thawing, samples were split into two 15 mL tubes.
Sterile liquid mineral medium (4 mL) was added to each tube
containing the column sand samples. Tubes were vortexed for
10 s and sonicated for 5 min with a Bransonic tabletop ultrasonic
cleaner model 1501 (40 kHz, 70 W, Branson Ultrasonic
Corporation, Danbury, CT) to disrupt biofilms and lyse cells.
Samples were then centrifuged at 4000 rpm for 5 min to
remove sand and particles generated during sonication.
Supernatants from duplicate tubes were combined into one
tube that served as the sample source for the protein assay
(analyzed in duplicate). Sand remaining in the tubes was
washed three times with ultra pure water and dried at 105 C
for 24 h in pre-weighed aluminum weigh boats. Sand samples
were cooled in a dessicator before being weighed. Protein
measurements were normalized to dry sand weight and are
reported as the mean of duplicate samples plus or minus one
standard deviation in mg protein per g dry sand. A Micro BCA
Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)
was employed according to the manufacturer’s instructions
using an Ultrospec 3100 Pro UV/Vis spectrophotometer
(Amersham Biosciences). Briefly, an albumin standard curve
was made ranging from 0 to 200 mg/mL protein. After mixing samples (1 mL) with the kit’s “working reagent” (1 mL) in test
tubes, the solutions were incubated at 60 C for 1 h. Standards
and samples were then analyzed with a spectrophotometer at
562 nm.

結果 (中文) 1:

所有列切片进行生物量分析300天
列操作停止时。以下为
从柱进口测定转移
无菌无菌15毫升聚丙烯管（BD
猎鹰，富兰克林湖，新泽西州）：0e2，2e3，11e13，18e20，27e28，
28e30厘米。样品储存在 80  C直到进一步的分析。
解冻后，样品拆分成两个15毫升的管。
无菌液体矿产介质（4毫升）被添加到每个管柱砂含
。管涡旋
10 s，超声处理5分钟一bransonic桌面超声
清洁模式1501（40千赫，70 W，布兰森超声
公司，丹伯里，CT）破坏生物膜和裂解细胞。
样品，然后以4000 rpm离心5分钟，
除砂颗粒中产生超声波。
重复管的上清液合并成一个
管作为蛋白质测定
样本来源（重复分析）。砂残留在管
用超纯水洗涤三次和干燥105  C
24小时预先称重的铝重船。
砂样品在冷却后称重干燥器。蛋白
测量归一化干砂的重量和
报道重复样品加上或减去在毫克蛋白质每克干砂的一个标准偏差的平均
。
微BCA蛋白测定试剂盒（Thermo Fisher Scientific，Waltham，MA）
采用根据制造商的指示
使用ultrospec 3100 Pro紫外可见分光光度计
（Amersham Biosciences公司）。简要，白蛋白标准曲线进行了
范围从0到200毫克/毫升的蛋白质。混合后的样品（1毫升）与试剂盒的“工作”试剂（1毫升）的测试
管，溶液孵育60  C 1小时标准
和样品然后在
562 nm的光谱分析。

結果 (中文) 2:

所有列被天 300 都截面为生物量分析
列操作停止时。以下段作为
从列入口测量被删除和转移
菌对不育 15 毫升的聚丙烯管 (屋宇署
猎鹰，富兰克林湖，新泽西州）： 0e2 2e3，11e13，18e20，27e28，
28e30 厘米样品被存放在 80 C 直到进一步分析。
在解冻以后，样本被分成了
无菌液体矿产介质 （4 毫升） 被添加到每个管
包含列砂样品。 两个 15 毫升管。管是为 vortexed
10 s 和气泡和超声波 Bransonic 桌面 5 分钟
清洁模型 1501年 (40 千赫，70 W，布兰森超声波
公司、 丹伯里，CT) 扰乱生物膜和溶解细胞。
样品然后离心 4000 rpm，5 分钟到
删除沙和在超声处理过程中生成的粒子
重复管上的清液被合并成一个
担任蛋白质测定的样品源的管
(analyzed in duplicate)。管中剩余的沙子是
洗三次与超纯净水和干在 105 C
24 h 在预先称量铝称重船。砂样本
dessicator 正在斟酌之前被冷却。蛋白
测量被规范化为干砂重量和
报告为平均值的重复样本加上或减去一个
g 每毫克蛋白中的标准偏差干砂。微 BCA
蛋白测定试剂盒 (热尔科技、 沃尔瑟姆，马萨诸塞)
雇用了按照制造商的说明
使用 Ultrospec 3100 临紫外/可见分光光度计
(Amersham Biosciences)。简单地说，白蛋白标准曲线
取得了从 0 到 200 毫克/毫升蛋白。混合 （1 毫升） 样品与试剂的工具包"工作"后 （1 毫升） 在测试中
管，解决办法孵化在 1 h.标准 60 C
，然后用分光光度计在分析样品了
562 毫微米。