Various biochemical, chemical, and

Various biochemical, chemical, and microspectroscopic methods have been developed throughout the years for the screening and identification of mutants with altered cell wall structure. However, these procedures fail to provide the insight into structural aspects of the cell wall polymers. In this paper, we present various methods for rapidly screening Arabidopsis cell wall mutants. The enzymatic fingerprinting procedures using high-performance anion-exchange-pulsed-amperometric detection liquid chromatography, fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis, and matrix-assisted laser-desorption ionization time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry (MS) were exemplified by the structural analysis of the hemicellulose xyloglucan. All three techniques are able to identify structural alterations of wall xyloglucans in mur1,mur2, and mur3, which in comparison with the wild type have side chain defects in their xyloglucan structure. The quickest analysis was provided by MALDI-TOF MS. Although MALDI-TOF MS per se is not quantitative, it is possible to reproducibly obtain relative abundance information of the various oligosaccharides present in the extract. The lack of absolute quantitation by MALDI-TOF MS was compensated for with a xyloglucan-specific endoglucanase and simple colorimetric assay. In view of the potential for mass screening using MALDI-TOF MS, a PERL-based program was developed to process the spectra obtained from MALDI-TOF MS automatically. Outliers can be identified very rapidly according to a set of defined parameters based on data collected from the wild-type plants. The methods presented here can easily be adopted for the analysis of other wall polysaccharides. MALDI-TOF MS offers a powerful tool to screen and identify cell wall mutants rapidly and efficiently and, more importantly, is able to give initial insights into the structural composition and/or modification that occurs in these mutants.

結果 (中文) 1:

这些年来与细胞壁结构变化的突变体的筛选和鉴定，已开发各种生化，化工，microspectroscopic的方法。然而，这些过程失败的细胞壁聚合物的结构方面提供的洞察。在本文中，我们提出了不同的方法快速筛选拟南芥细胞壁突变。酶促指纹使用高性能阴离子交换脉冲安培检测的液体色谱法，荧光辅助碳水化合物电泳，和基质辅助激光解吸电离飞行时间（MALDI-TOF）质谱（毫秒）的程序的例子有结构分析的半纤维素的木葡聚糖。所有三个技术能够识别的墙xyloglucans在结构上的改动mur1，mur2，mur3，与野生型相比，有侧链在他们的木聚糖结构的缺陷。 MALDI-TOF MS分析所提供的最快。虽然MALDI-TOF MS本身是不定量，这是可能的再现得到的提取物中存在的各种寡糖的相对丰度信息。 MALDI-TOF MS绝对定量缺乏一个的木葡聚糖特定内切葡聚糖酶和简单的比色测定。鉴于使用MALDI-TOF MS的潜在大规模筛选，方案是一个基于perl的MALDI-TOF MS获得的光谱自动处理。离群值可以非常迅速地识别根据基于从野生型植物中收集的数据的定义的参数的一组。这里介绍的方法，可以很容易地通过用于分析的其他壁多糖。MALDI-TOF MS提供了一个强大的工具，筛选和鉴定细胞壁突变，迅速和有效地，更重要的是能够给初始的结构组成和/或修改发生在这些突变体的洞察。

結果 (中文) 2:

各种生化，化学，和光谱方法已开发多年的筛选和鉴定突变改变细胞壁结构。然而，这些程序不能提供深入的结构方面的细胞壁聚合物。在本文中，我们目前的各种方法快速筛选拟南芥突变体细胞壁。酶指纹的程序使用高效anion-exchange-pulsed-amperometric检测液相色谱，荧光辅助糖电泳，基质辅助激光解吸电离飞行时间（质谱）质谱（质谱）都体现的结构分析的半纤维素木。所有这三个技术能够确定的结构性改变，xyloglucans mur1壁中，mur2，和mur3，这相对于野生型侧链缺陷的木结构。最快的分析提供了MALDI - TOF质谱本身虽然不是定量，这是可能的，可重复获得的相对丰度的信息的各种低聚糖提取液中。缺乏绝对定量解吸电离飞行时间质谱是由一木特定内切和简单的比色法测定。鉴于潜在的大规模筛选使用解吸电离飞行时间质谱，一种基于Perl程序开发过程中获得的光谱质谱自动。离群点可以确定非常迅速按照一套定义的参数的基础上收集的数据从野生型植物。这里提出的方法可以很容易地通过分析其他壁多糖。解吸电离飞行时间质谱提供了一个功能强大的工具，筛选和鉴定的细胞壁突变迅速和有效，更重要的是，能够提供初步的见解的结构组成和/或修改发生在这些突变体。

結果 (中文) 3:

各种生化、 化工和光谱方法各地已发展多年的筛选和鉴定突变体改变的细胞壁结构。但是，这些程序未能提供洞察到了细胞壁聚合物的结构方面问题。在本文中，我们现有的各种方法快速筛检细胞壁拟南芥突变体。酶指纹识别程序，使用高性能阴离子交换脉冲-安培检测液相色谱法、 电泳荧光协助碳水化合物、 和基质辅助激光解吸电离飞行 (进行质谱 TOF) 质谱 (MS) 时间，譬如半纤维素葡的结构分析。所有三种方法都能够识别的墙 xyloglucans mur1、 mur2，和 mur3，其中与野生型相比在其葡结构中有侧链缺陷结构改动。最快的分析提供了-质谱。虽然本身-质谱不是定量的它是可能可复用获得的提取物中存在的各种低聚糖的相对丰度信息。绝对定量-质谱的缺乏是与特定的葡葡聚糖酶和简单的对比色的赔偿。用于大规模筛查潜力来看，使用-质谱开发一个基于 PERL 的程序是为了处理自动从-质谱获得的光谱。离群值可以非常迅速地根据一组已定义的参数的基础从野生型植物收集的数据的标识。这里介绍的方法很容易可以通过分析其他墙体多糖的了。-质谱提供了一个功能强大的工具，进行筛选，并迅速查明细胞壁突变体和高效率和更重要的是能够初步洞察的结构组成和/或修改这些突变体中发生的。