如别处所述,将感染2-3个月的灵猫仓鼠肝固定并用切片机切成4微米的切片[19]。简而言之,切片在二甲苯中脱蜡,分别在一系列乙醇和蒸馏水中水合。通过用含有3% H2O2的无水甲醇处理切片组织30分钟来消除内源性过氧化物酶。然后将切片用水和PBS洗涤。通过用Novocastra蛋白块(德国徕卡)处理载玻片30分钟来阻断非特异性染色。将在PBS中稀释的小鼠抗蛋白14-3-3血清(1/100 v/v)应用于切片,并在室温下孵育1小时。用PBS冲洗3 × 5分钟后,将切片与辣根过氧化物酶结合的山羊抗小鼠IgG孵育1小时。用PBS冲洗切片3 × 5分钟,然后用二氨基联苯胺(DAB)试剂检测结合的抗体。然后用迈尔苏木精复染切片,脱水,在二甲苯中清除,并安装在Permount中。安装好的切片在光学显微镜下检查,图像用数码相机拍摄。
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