The decreased velocity and chemomec

The decreased velocity and chemomechanical coupling of the extended kinesins is most likely due to the loss of intramolecular tension, but it was important to rule out alternative consequences that might arise from neck linker amino acid insertion. We therefore investigated whether it might be possible to increase the velocity of an extended kinesin by restoring tension via chemical crosslinking. To accomplish this, we inserted a cysteine at the N terminus of the 13P insertion in a cysteine-light kinesin construct (termed Cys-13P) (Figure 2A) and then covalently linked these cysteines in the two chains of the kinesin dimer with a bifunctional crosslinking agent. The position of this interchain crosslink should be similar to the start of neck coiled-coil in WT kinesin and thus might be expected to restore intramolecular tension. Under optimized conditions, ∼50% of the Cys-13P kinesin construct were crosslinked, whereas the cysteine-light kinesin template showed no crosslinking (Figure 2B). In the absence of crosslinker, Cys-13P moved at 116 nm/s (Figure 2C). However, in the presence of crosslinker, a second, higher velocity peak was observed at 250 nm/s (Figure 2D). The approximate proportion of these two peaks is consistent with the ratio of crosslinked to non-crosslinked motor (Figure 2B). These crosslinking experiments further support our conclusion that tension between the two heads is important for the normal velocity of kinesin movement.

結果 (中文) 1:

下降的速度和扩展动蛋白的化学机械耦合是最有可能由于分子内张力的损失，但重要的是要排除其他可能出现的后果，从颈部连接器插入氨基酸。因此，我们调查是否有可能恢复张力通过化学交联，增加一个扩展的驱动蛋白的速度。做到这一点，我们插入半胱氨酸的光动蛋白结构13p的插入（称为半胱 - 13p的）（图2a）的N末端的半胱氨酸，然后共价连接这些半胱氨酸残基，在两条链的驱动蛋白二聚体与双官能交联剂。这样的链间交联的位置应该是相似的重量动蛋白的卷曲螺旋颈开始，因此，可以预料，还原分子内的张力。 〜50％的半胱 - 13p的动蛋白结构在优化的条件下，进行交联，而半胱氨酸光动蛋白模板没有显示交联（图2b）。在没有交联剂的情况下，半胱氨酸13p的移动在116 nm / s时（图2c）。然而，在交联剂的存在下，观察到更高的第二速度的峰值在250 nm / s时（图2d）。这两个峰的近似比例与交联的非交联的电机（图2b）的比例是一致的。这些交联实验进一步支持我们的结论是，两国元首之间的紧张关系是很重要的驱动蛋白运动的正常速度。

結果 (中文) 2:

由于分子内张力损失下降速度和力-化学耦合的扩展驱动蛋白是最有可能的，但它是以排除其他可能出现的后果，从颈部连接氨基酸插入重要。我们调查是否有可能恢复张力通过化学交联增加扩展驱动蛋白的速度。要做到这一点，我们插入一个半胱氨酸在半胱氨酸光驱动蛋白13P插入N末端结构（称为cys-13p）（图2A），然后共价连接这些半胱氨酸与双官能交联剂的两条链的驱动蛋白二聚体。这个链间交联的位置应类似于颈部开始盘绕在WT驱动蛋白线圈，从而可能恢复的分子内张力。在优化条件下，∼50%的cys-13p驱动蛋白结构交联，而半胱氨酸光驱动蛋白模板无交联（图2b）。在交联剂的缺失，cys-13p移动在116 nm / s（图2C）。然而，在交联剂的存在下，第二，在250 nm / s时观察到更高的速度峰值（图2）。这两个峰的近似比例与比例的非交联的交联电机一致（图2b）。这些交联实验进一步支持了我们的结论，两目之间的张力的驱动蛋白运动正常速度是很重要的。

結果 (中文) 3:

扩展的驱动蛋白的下降的速度和 chemomechanical 耦合是最可能的原因损失的分子内的紧张局势，但对替代性后果可能产生的颈部链接器氨基酸插入规则是重要的。我们因此调查是否有可能增加的速度扩展驱动蛋白通过还原通过化学交联的紧张。若要实现此目的，我们插入半胱氨酸半胱氨酸光驱动蛋白构造 (称为 Cys-13 P) 中 13 P 插入 N 总站 (图 2A)，然后共价键连这些驱动蛋白二聚体与双功能交联剂的两个链的半胱氨酸。此 interchain 交联的位置应该是类似于开始的脖子盘绕线圈在 WT 驱动蛋白和因而预计可能恢复分子内张力。根据优化条件，∼50 %cys-13 P 驱动蛋白构造的交叉链接，而半胱氨酸光驱动蛋白模板显示没有交联 (图 2B)。交联剂，缺席Cys-13 P 移动 116 nm/s （图 2）。然而，存在下交联剂，第二次、 更高的速度峰值在红潮 250 nm/s (图 2D)。这些两个山峰的大致比例是符合交联非交联电机 (图 2B) 的比率。这些交联实验进一步支持我们的结论两个头之间的紧张关系是重要的驱动蛋白运动的正常速度。