4.2.3 LARVAL ASSAYSFertilised eggs

4.2.3 LARVAL ASSAYS
Fertilised eggs were first cultured in a 4-L glass jar at a density of 30 embryos/ml for three days, before being transferred to 2-L glass jars at a density of 1 larva/ml. Details
of the experimental set-up are provided in section 3.2.3. The temperature was 16.5°C ±1 throughout the whole experiment. Larvae were fed after each water change with D. tertiolecta from a clean culture or a copper enriched culture, depending on treatment, at a concentration of 8000 cells/ml. Algal stocks were rinsed thoroughly by three successive centrifugations (1201 g for 5 min) and re-suspensions in clean FSW, before being fed to the larvae to remove traces of metal unabsorbed by algae.Jars in the Diet and Diet + Water treatments, including both chronic and pulse exposure, were sampled at 15 and 24 d post-fertilisation, and jars in the Water treatment were sampled 16, 23 and 29 d post-fertilisation. Controls were sampled at 15 and 23 d post-fertilisation. During sampling, the water level in each jar was lowered to 750 ml to increase larval density and 3 x 15 ml aliquots were taken per jar.
Jars were randomly numbered and all measurements were conducted blind with regard to the treatment classification. The number of live larvae was counted in each aliquot using a dissecting microscope (40x magnification). Each live larva was assigned to one of nine developmental categories. The categories were the same as in Table 3.2, except that the 8-armed pluteus category was further divided in three categories: 8-armed pluteus with no visible rudiment, pluteus with small rudiment and competent pluteus (Table 4.3). Plutei with a rudiment and 8-armed plutei were always considered as normal. While 6-armed plutei were considered as normal until day 16 (inclusive). The first ten normal larvae encountered were preserved in 40% ethanol to be photographed under a compound microscope (50x magnification).
Measurements of larval body and arm lengths (average of R and L arms where possible; Table 4.3), as well as size of the juvenile rudiment in the late larval stage,were performed using the software ImageJ.

結果 (中文) 1:

4.2.3 幼虫化验受精卵第一次三天，然后被转移到在 1 幼虫密度 2-L 玻璃罐培养密度为 30ml 胚胎 4-L 玻璃罐子里 / 细节毫升。实验装置的是 3.2.3 节中提供。试验温度为 16.5 ° C ± 1 贯穿了整个实验过程。幼虫喂食后每个水随 D.藻粉从清洁的文化或铜的富集的培养，根据治疗，细胞浓度的 8000 / 毫升藻类种群彻底冲洗由三个连续洗涤 (1201 g 为 5 分钟) 和再悬浮在干净的搅拌摩擦焊前送入到幼虫以去掉金属吸收的藻类。饮食和饮食的震击器 + 水疗法，包括慢性和脉冲曝光，15 和 24 d 后受精，取样和水处理罐采样 16、 23 和 29 d 后受精。控件被采样在 15 和 23 d 后受精。在取样，过程中每个瓶子里的水位降至 750 毫升增加幼虫密度和 3 x 15 毫升被每罐。所有的测量进行盲目关于治疗分类和罐子被随机编号。活幼虫数在每个分装用解剖显微镜 （40 x 放大）。每个活幼虫被分配到九个发展类别之一。类别是表 3.2 一样只是 8 武装长腕幼虫类别被进一步划分为三个类别 ︰ 8 武装长腕幼虫与不可见的雏形，长腕幼虫与小雏形和主管长腕幼虫 (表 4.3)。与一个雏形，还有 8 武装 plutei Plutei 是被视为正常。同时 6 武装 plutei 被认为是一样正常直到天 16 （包容性）。遇到的第一次十正常幼虫完好以 40%的乙醇，拍摄下复合显微镜 （放大 50 倍）。幼虫的身体和手臂长度测量 （平均的 R 和 L 武器在可能的情况下;表 4.3），以及在幼虫阶段末期的少年雏形的大小，采用严格的软件 ImageJ。

結果 (中文) 2:

4.2.3幼虫ASSAYS
受精卵是在一个4升玻璃瓶先培养在30个胚/ ml的密度为三天，以1幼虫/ ml的密度转移到2升的玻璃瓶之前。细节
在3.2.3节中提供了实验设置的。温度为16.5℃±1在整个实验。幼虫从干净培养用D. tertiolecta每个水变化或铜富集培养后供给，这取决于治疗，以8000个细胞/ ml的浓度。藻类股由三个连续的离心（1201 g下5分钟），并重新悬浮在干净的FSW，彻底漂洗被馈送到幼虫通过在饮食与饮食+水治疗algae.Jars，包括以除去金属未吸收的痕量的前慢性和脉冲曝光，在15和24ð受精后进行取样，并在水处理罐进行取样16，23和29ð受精后。对照物在15和23 D受精后取样。期间的采样，在每个瓶中的水位降低到750 ml至增加幼虫密度和每罐取3×15毫升分装。
罐子随机编号，所有的测量进行了盲关于治疗分类。的活幼虫数使用解剖显微镜（放大40倍），每个等分试样进行计数。每个活幼虫被分配到九个发展类别之一。的类别是相同的，如表3.2，所不同的是在8武装长腕幼虫类在三类进一步划分：8武装长腕幼虫无可见雏形，长腕幼虫用小雏形和主管长腕幼虫（表4.3）。有雏形和8个武装plutei Plutei一向被认为是正常的。虽然6武装plutei被认为是正常的，直到第16天（含）。遇到在40％乙醇分别保存前十个正常幼虫的化合物显微镜（50倍 ​​放大率）下拍照。
幼虫体和臂的长度（R和L臂在可能的平均值;表4.3）的测量，以及大小后期幼虫期少年雏形，用软件ImageJ的执行。

結果 (中文) 3:

4.2.3幼虫的检测受精卵在密度为30胚/毫升三天在一个4升的玻璃瓶培养，然后转到2玻璃瓶的密度为1头/毫升的细节该实验装置在第3.2.3提供。整个实验过程中，温度为16.5°C为1°。幼虫每次换水后用D. tertiolecta廉洁文化的或铜的富集培养，取决于治疗，在浓度为8000细胞/毫升藻股彻底冲洗三连续离心（1201 g，5 min）和再悬浮在干净的搅拌摩擦焊，在被喂养幼虫的藻类除去金属残留的痕迹。在饮食和饮食+水处理罐，包括慢性和脉冲照射，在15和24天受精后进行采样，并在水处理罐进行16、23和29 d后受精。对照组在15 d和23 d后受精的采样。在取样过程中，每个罐的水位降到750毫升增加幼虫密度和3 x 15毫升等分试样每罐。瓶被随机编号，所有的测量进行了盲的治疗分类。活幼虫的数量在各等分用解剖显微镜下计数（40x放大）。每个活幼虫被分配到一个九个发展类别。类如表3.2相同，除了那8-armed pluteus类又分为三大类：8-armed pluteus没有可见的雏形，小萌芽和主管pluteus pluteus（表4.3）。一个雏形，8-armed plutei plutei总是被认为是正常的。而6-armed plutei为正常至16天（含）。第一十正常幼虫遇到被保存在40%乙醇被拍到复合显微镜下（50x放大）。幼虫的身体和手臂的长度测量（R和L的手臂在可能的地方；平均表4.3），以及青少年的雏形的大小在幼虫阶段后期，使用软件ImageJ进行。