T4 polynucleotide kinase is widely

T4 polynucleotide kinase is widely used for 5′-phosphorylation of DNA and RNA oligonucleotide termini,
but no natural protein enzyme is capable of 3′-phosphorylation.Here, we report the in vitro selection of deoxyribozymes(DNA enzymes) capable of DNA oligonucleotide 3′-phosphorylation, using a 5′-triphosphorylated RNA transcript(pppRNA) as the phosphoryl donor. The basis of selection was the capture, during each selection round, of the 3′-phosphorylated DNA substrate terminus by 2-methylimidazole activation of the 3′-phosphate (forming 3′-MeImp) and subsequent splint ligation with a 5′-amino DNA oligonucleotide.
Competing and precedented DNA-catalyzed reactions were DNA phosphodiester hydrolysis or deglycosylation, each also leading to a 3′-phosphate but at a different nucleotide position within the DNA substrate. One oligonucleotide 3′-kinase deoxyribozyme, obtained from an N40 random pool and named 3′Kin1, can 3′-phosphorylate nearly any DNA oligonucleotide substrate for which the 3′-terminus has the sequence motif 5′-NKR-3′, where N denotes any oligonucleotide sequence, K = T or G, and R = A or G. These results establish the viabilty of in vitro selection for identifying DNA enzymes that 3′-phosphorylate
DNA oligonucleotides.

結果 (繁體中文) 1:

T4 多聚核苷酸激酶廣泛用於 5 ′-磷酸化的 DNA 和 RNA 寡核苷酸總站，但沒有天然蛋白質酶是能夠的 3 ′-磷酸化。在這裡，我們報告 deoxyribozymes(DNA enzymes) 的 DNA 寡核苷酸 3 ′-磷酸化，能夠在體外選擇利用 RNA 5 ′ triphosphorylated transcript(pppRNA) 作為磷醯基供。選擇的依據是捕獲，在 2-甲基咪唑活化的 3 ′-磷酸 (形成 3 ′-MeImp) 和隨後的夾板結紮 5 ′-氨基的 DNA 寡核苷酸 3 ′ 端磷酸化 DNA 基板總站圓，每個所選期間。競爭和先例的 DNA 催化反應是 DNA 磷酸二酯水解或去糖基，每個也導致 3 ′-磷酸不過點內 DNA 承印物的不同的核苷酸位置上。一個寡核苷酸 3 ′-激酶去氧核酶，取自 N40 隨機池，命名為 3′Kin1，可以 3 ′-能磷酸化幾乎任何 DNA 寡核苷酸底物的 3 ′ 端有序列母題 5 ′-挪威克朗-3 ′，其中 N 表示任何寡核苷酸序列，K = T 或 G 和 R = A 或 G.這些結果建立的識別 DNA 酶體外選擇 viabilty，3 ′-能磷酸化DNA 寡核苷酸。

結果 (繁體中文) 2:

T4多核苷酸激酶被廣泛地用於DNA和RNA寡核苷酸末端的5'-磷酸化，
但沒有天然蛋白酶能夠3'- phosphorylation.Here的，我們報告脫氧核酶（脫氧核糖核酸酶）能夠DNA寡核苷酸3的體外選擇“-phosphorylation，用5'-三磷酸RNA轉錄物（pppRNA）作為磷捐助。選擇的依據是在捕獲，每一輪選擇中，3'-磷酸化的DNA底物末端的由3'-磷酸2-甲基咪唑活化（形成3'- MeImp）中，用5'-氨基後續夾板結紮DNA寡核苷酸。
競爭和先例DNA催化反應是DNA的磷酸二酯水解或去糖基化，每個也導致3'磷酸鹽，但在DNA底物中的不同核苷酸位置。一個寡核苷酸3'-激酶脫氧核酶，從N40隨機池獲得並命名3'Kin1，可以3'-磷酸化幾乎為哪些3'-末端具有序列基序5'-NKR-3'，其中任何DNA寡核苷酸底物N表示任何寡核苷酸序列，K = T或G，和R = A或G，這些結果證實在體外選擇的viabilty用於識別的DNA的酶，3'-磷酸化
的DNA寡核苷酸。

結果 (繁體中文) 3:

T4多核苷酸激酶廣泛用於5′- DNA和RNA寡核苷酸末端磷酸化，但是沒有天然蛋白質酶能够3′-phosphorylation.here，我們報告的脫氧核酶的體外篩選（DNA酶）能够DNA寡核苷酸3′磷酸化，用5′-磷酸化的RNA轉錄（ppprna）為磷酸供體。選擇依據是捕捉，每一輪選拔中，3的′-磷酸化的DNA底物的終點站由3′-甲基咪唑磷酸活化（形成3′- MeImp）和5′氨基DNA寡核苷酸隨後夾板結紮。競爭和史無前例的DNA催化反應進行DNA的磷酸二酯的水解或去糖基化，也導致了3′磷酸但在DNA底物不同的核苷酸位置。一個寡核苷酸3′激酶脫氧核酶，從池中獲得很隨機和命名3′Kin1，可以3′-磷酸化幾乎任何DNA寡核苷酸的基板，3′端有基序的5′- nkr-3′，其中N表示任何的寡核苷酸序列，k = T或G，R =一這些結果或活力的體外篩選鑒定DNA的酶，3′-磷酸化的建立DNA寡核苷酸。