centration (45). TRPV1 has been rep

centration (45). TRPV1 has been reported to be primarily
expressed in peripheral afferent sensory neurons type C and in
A fibers originating from dorsal root ganglia (8). However,
recent studies have also demonstrated that TRPV1 is expressed
in some nonneuronal tissues and cells (2, 6, 25, 35, 41), where
it functions to regulate inflammatory cytokine production fol￾lowing exposure to TRPV1 agonists (12, 21, 29, 33, 48).
Although TRPV1 has been considered as a molecular sensor of
chemical and physical stimuli in nonneuronal cells, the precise
function of this protein is not yet clear.
Human esophageal epithelium is continuously exposed to
physical stimuli or gastric acid that sometimes causes inflam￾mation of the mucosa. Acute or chronic exposure of the human
esophagus to acid can lead to hypersensitivity of the mucosa.
Gastroesophageal reflux disease (GERD), which is induced by
reflux of the gastric and duodenal contents into the esophagus,
has recently come to be recognized as a serious clinical
problem that manifests as reflux symptoms, hurt burn, and
chest pain. The occurrence of GERD is related to relaxation of
the lower esophageal sphincter (LES) and to increased gastric
acid secretion. Moreover, inflammatory cytokines, leukocytes,
and oxidative stress have been demonstrated to be involved in
the hypersensitivity of reflux esophagitis (30, 43, 44, 46).
Interestingly, TRPV1 expression has been detected in sensory
nerve fibers of esophageal mucosa from patients with GERD or
nonerosive reflux disease (5, 28). This finding might suggest
that esophageal hypersensitivity is also associated with acid￾induced activation of TRPV1 (3, 12) because TRPV1 is be￾lieved to be a mediator of neurogenic inflammation. However,
it remains unknown whether TRPV1 is expressed in human
esophageal epithelial cells or whether TRPV1 mediates inflam￾mation of the esophagus.
In this study, we investigated the expression and function of
TRPV1 in the human esophageal epithelial cell line Het1A,
with a specific focus on the role of oxidative stress.
MATERIALS AND METHODS
Reagents. Capsaicin, capsazepine, and ruthenium red were ob￾tained from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Stock concentrations of
capsaicin (100 mM), capsazepine (100 mM), and ruthenium red (10
mM) were dissolved in ethanol, dimethyl sulfoxide, and distilled
water and were diluted in media to the appropriate concentration.
Redox Sensor Red CC-1 was purchased from Molecular Probes
(Eugene, OR). Biotinylated cysteine was prepared as previously
described (15, 20). 4-Hydroxy-2-nonenal (HNE) was a generous gift
of Dr. Uchida, Graduate School of Bioagricultural Sciences, Nagoya
University (Nagoya, Japan). Polyclonal rabbit and goat anti-TRPV1

結果 (中文) 1:

浓度 (45)。TRPV1 据报主要是外周感觉传入神经 C 型和表达起源于背根神经节 (8) 的纤维。然而，最近的研究也表明 TRPV1 表示在一些 nonneuronal 的组织和细胞 （2、 6、 25、 35、 41），在哪里它的功能，调节炎性细胞因子生产 fol 降低暴露于 TRPV1 受体激动剂 （12、 21、 29、 33、 48）。虽然 TRPV1 一直被视为一种分子传感器在 nonneuronal 细胞中，精确的物理和化学刺激这种蛋白质的功能尚不清楚。人食管上皮不断暴露物理的刺激或胃酸，有时会导致咽喉炎畅通的粘膜。急性或慢性暴露的人食管酸可以导致过敏症的粘膜。胃食管反流病 (GERD) 所致进入食道，胃和十二指肠内容反流最近有被承认为严重临床表现为反流症状，伤烧伤的问题和胸部疼痛。胃食管反流的发生被相关的放松食管下括约肌 (LES)，并增加胃胃酸的分泌。此外，炎性细胞因子、 白细胞，事实证明的有氧化应激参与过敏症的返流性食管炎 （30、 43、 44、 46）。有趣的是，检测中感官 TRPV1 表达神经纤维的 GERD 患者的食管粘膜或非糜烂性反流病 （5、 28）。这一发现可能会建议食管内脏高敏感性也是与酸诱导激活 TRPV1 （3，12） 因为 TRPV1 是如今要调解神经源性炎症。然而，它仍然是未知是否 TRPV1 表达在人食管上皮细胞或是否 TRPV1 介导的食道咽喉炎畅通。在此研究中，我们调查的表达和功能TRPV1 在人类食管上皮细胞系 Het1A，具体的重点放在氧化应激的作用。材料和方法试剂。辣椒素、 辣椒平和钌红被泥沙从西格玛奥德里奇 （圣路易斯，密苏里州）。股票的浓度辣椒素 （100 毫米）、 辣椒平 （100 毫米） 和钌红 (10mM) 被溶解在乙醇中，二甲基亚砜和蒸馏水和被稀释至适当浓度的介质中。氧化还原传感器红 CC-1 是从分子探针购买(尤金，OR)。生物素化的半胱氨酸，制得像以前那样描述 （15，20）。4-羟基-2-壬烯醛 (HNE) 是一个慷慨的礼物Bioagricultural 研究生学校科学博士 Uchida 名古屋大学 （日本名古屋）。多克隆兔和山羊抗 TRPV1

結果 (中文) 3:

（45）浓度。TRPV1已经报道是表达在外周传入感觉神经元C型和一种起源于背根神经节（8）的纤维。然而,最近的研究还表明，TRPV1表达在一些非神经组织和细胞（2，6，25，35，41），其中它的功能来调节炎症细胞因子的产生而￾降低暴露于TRPV1激动剂（12，21，29，33，48）。尽管TRPV1一直被视为一个分子传感器在非神经细胞的化学和物理刺激，精确这种蛋白质的功能还不清楚。人食管上皮细胞持续暴露于物理刺激或胃酸，有时会引起炎症的黏膜￾信息。急性或慢性暴露的人食道对酸会导致粘膜的过敏性。胃食管反流病（GERD），这是引起胃和十二指肠内容物回流到食管，最近已被确认为一个严重的临床问题，表现为回流症状，伤害烧伤，和胸部疼痛。GERD的发生是放松相关食管下括约肌（大肌）和胃增加酸分泌。此外，炎性细胞因子，白细胞，和氧化应激已被证明是参与反流性食管炎的超敏反应（30，43，44，46）。有趣的是，TRPV1表达中已检测到的感觉神经纤维食管黏膜患者格尔德或非糜烂性反流病（5、28）。这一发现可能表明食管过敏也与酸￾诱导激活TRPV1相关（3，12）因为TRPV1是￾相信会介导的神经源性炎症。然而,目前还不清楚是否TRPV1表达的人食管上皮细胞介导的炎症￾信息是否TRPV1的食道。在这项研究中，我们调查的表达和功能在人食管上皮细胞系HET1A TRPV1，有了具体的重点氧化应激的作用。材料与方法试剂。Capsaicin，辣椒素，钌红、观察￾获得Sigma Aldrich（St.路易斯，MO）。股票浓度辣椒素，辣椒素（100毫米）（100毫米），和钌红（10mm）溶解在乙醇、二甲基亚砜、蒸馏水和稀释在媒体适当的浓度。氧化还原传感器红色CC-1购买从分子探针（尤金，或）。制备生物素标记的半胱氨酸以前描述（15，20）。4-羟基壬烯醛（HNE）是一个慷慨的礼物Uchida博士，大学院农学研究科名古屋大学（名古屋，日本）。多克隆兔和羊anti-trpv1