2.5. Total RNA extraction and real-

2.5. Total RNA extraction and real-time PCR Total RNAs were isolated from the seeded cells in 60 mm2 plate by using the TRIzol reagent (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) and processed for the synthesis of cDNAs. Reverse-transcription (RT) reactions were conducted by incubating 200 ng of the total RNAs with a reaction mixture. The mixture is containing 0.5 μg/μl oligo dT12- 18 and 200U/μl Moloney Murine Leukemia Virus RT (Life Technologies). Then, relative quantification of mRNA levels were performed using Roche LightCycler (Roche, Mannheim, Germany) with the SYBR Premix ExTaq system (Otsu, Japan) [41]. All primers were synthesized by Bioneer and the primer sequences for mouse Keap1, nqo1, Nrf2, Smad7, TβR1, Smurf1, and 18sRNA are shown in Table 1.

結果 (繁體中文) 1:

2.5。總RNA提取和實時PCR
總RNA從接種的細胞在60平方毫米板通過使用TRIzol試劑（賽默飛世爾科技公司，沃爾瑟姆，MA，USA）分離和cDNA的合成處理。逆轉錄（RT）反應通過溫育200ng的總RNA的與反應混合物中進行。將混合物含有0.5微克/微升寡聚dT12- 18和200U /μl的莫洛尼鼠白血病病毒RT（Life Technologies）中。然後，使用羅氏的LightCycler（Roche公司，曼海姆，德國）用SYBR預混料ExTaq系統（大津，日本）[41]進行的mRNA水平的相對定量。所有引物由Bioneer公司和用於鼠標Keap1的，NQO1，Nrf2的，Smad7的，TβR1，Smurf1和18sRNA的引物序列合成示於表1中。

結果 (繁體中文) 2:

2.5. 總RNA提取和即時PCR
使用TRIzol試劑從60 mm2板的種子細胞中分離出總RNA，並經過處理以合成cDNA。逆轉錄（RT）反應通過用反應混合物孵育總RNA的200納克進行。混合物含有0.5μg/μl寡聚物dT12-18和200U/μl莫洛尼毛尿白血病病毒RT（生命技術）。然後，使用羅氏輕迴圈器（德國曼海姆的羅氏）與SYBR預混合ExTaq系統（日本大津）進行mRNA水準的相對定量[41]。所有引體均由Bioneer合成，表1顯示了小鼠Keap1、nqo1、Nrf2、Smad7、T+R1、藍精靈1和18sRNA的引種序列。

結果 (繁體中文) 3:

2.5條。總RNA選取與實时PCR
用TRIzol試劑（Thermo Fisher Scientific Inc.，Waltham，MA，USA）在60mm2平板上從種子細胞中分離總rna，並進行cDNAs合成處理。逆轉錄（RT）反應是通過用反應混合物孵育200ng總rna來進行的。混合物含有0.5μg/μl寡糖dT12-18和200U/μl Moloney小鼠白血病病毒RT（生命科技）。然後，使用Roche LightCycler（Roche，Mannheim，Germany）和SYBR Premix ExTaq系統（Otsu，Japan）[41]對mRNA水准進行相對量化。所有引子均由Bioneer合成，小鼠Keap1、nqo1、Nrf2、Smad7、TβR1、Smurf1和18sRNA的引子序列如錶1所示。