We induced early hatching using two

We induced early hatching using two types of cues. The earliest hatching in A. callidryas occurs in response to hypoxia at 3 days, whereas the onset of predator-induced, mechanosensory-cued hatching occurs later, usually at 4 days (Warkentin et al.,2017). To induce hatching of 3-day-old embryos, we used boiled, degassed water. In one developmental series,we tested all clutches for hatching competence at 3.75 days by submerging three eggs per clutch in hypoxic water in sealed glass vials. We removed tadpoles as soon as they hatched; eggs that did not hatch after 45 min were considered ‘not hatching competent’ and returned to air. We induced hatchingof 4-day-old embryos using mechanosensory cues delivered by jiggling embryos with a moistened blunt probe. As in the hypoxia-induced hatching protocol, a subset of each clutch was induced to hatch at 4 days and followed through development for comparison with siblings that remained in the egg.For specimen collection, tadpoles were euthanized with an overdose of buffered MS-222 before fixation.To prevent hatching of embryos during specimen collection, we chilled them on ice until they were unresponsive, then manually decapsulated them with forceps before preservation in ice-cold fixative.

結果 (繁體中文) 1:

我們誘導大鼠早期孵化使用兩種類型的線索。在A. callidryas最早孵化發生響應於缺氧在3天，而捕食誘導的，機械感覺-線索孵化的發作發生後，通常是在4天（Warkentin等人，2017）。為了誘導的3日齡孵化，我們使用煮，脫氣水。在一個發展的系列中，我們測試的所有離合器，通過在密封的玻璃瓶浸入每個離合器三個雞蛋缺氧水3.75天孵化能力。我們會立即刪除蝌蚪，因為他們孵化; 未經過45分鐘孵化的雞蛋被認為是“不稱職孵化”，並返回到空氣中。我們誘導孵化
使用由輕搖用濕潤的鈍頭探子胚胎輸送機械感覺線索4日齡。正如在低氧誘導的孵化協議，各離合器的一個子集在4天誘導艙口和隨後通過開發用於與保留在egg.For試樣收集在兄弟姐妹比較，蝌蚪用緩衝MS-222的過量安樂死前fixation.To防止標本採集過程中的胚胎孵化，也沒敢他們在冰上，直到他們反應遲鈍，然後手動保存在冰冷的固定液前鉗子解封裝它們。

結果 (繁體中文) 2:

我們使用兩種類型的線索誘導早期孵化。最早的孵化發生在A.callidryas的3天對缺氧的反應，而捕食者誘導的、麥卡諾感官的孵化的開始發生在較晚，通常為4天（Warkentin等人，2017年）。為了誘導3天大的胚胎孵化，我們使用了煮沸的脫氣水。在一個開發系列中，我們通過將每個離合器的三個雞蛋浸入密封玻璃瓶中的低氧水中，測試了所有離合器在 3.75 天內的孵化能力。我們一孵化，就把小蟲子移走;45分鐘後沒有孵化的卵子被認為"不能孵化"，並返回空中。我們誘導孵化
4天大的胚胎，使用用濕潤鈍探針晃動胚胎的感官提示。與缺氧誘導的孵化方案一樣，每個離合器的子集在4天內被誘導孵化，然後通過發育與留在卵子中的兄弟姐妹進行比較。在標本採集中，在固定前用過量的緩衝MS-222對小白鼠進行安樂死。為了防止在採集標本期間孵化胚胎，我們在冰上冷凍胚胎，直到它們沒有反應，然後用鉗子手動將其除蓋，然後再保存在冰冷的固定劑中。

結果 (繁體中文) 3:

我們用兩種線索誘導早期孵化。愈傷組織最早的孵化發生在3天的缺氧反應中，而捕食者誘導的、機械感覺提示的孵化發生在4天之後（Warkentin等人，2017）。為了誘導3日齡胚胎的孵化，我們使用煮沸的去氣水。在一個發育系列中，我們在3.75天時，通過在密封的玻璃小瓶中的缺氧水中浸泡每個離合器的三個雞蛋來測試所有離合器的孵化能力。蝌蚪一孵出，我們就把它們移走；45分鐘後不孵化的卵被認為“不適合孵化”，並返回到空氣中。我們誘導孵化
4天大的胚胎，用一個濕潤的鈍探針搖動胚胎產生的機械感覺線索。在缺氧誘導孵化方案中，每只幼崽的一個子集在4天時被誘導孵化，然後與留在卵中的同胞幼崽進行發育比較。在標本採集方面，在固定前用過量的緩衝MS-222對蝌蚪實施安樂死。為防止標本採集期間胚胎孵化，我們把它們放在冰上冷藏，直到它們沒有反應，然後用鑷子手動將它們解包，然後用冰鎮固定劑保存。