The cells were seeded in 96-well pl

The cells were seeded in 96-well plates, allowed to recover for 24 h in complete medium, and were then exposed to TG02 for acute 72 h growth inhibition assays (high seeding density) or for assessment of clonogenic survival (low seeding density). Metabolic activity was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay (Sigma). It was previously confirmed to reflect numbers of colonies or spheres.24 Induction of cell death at 72 h treatment was evaluated by annexin V (AnxV) and propidium iodide (PI) (BD PharMingen and Sigma) flow cytometry. Staurosporine-induced apoptosis was used as a positive control. Fluorescence for each condition was recorded in a BD FACSuite™ (BD Biosciences) flow cytometer and analyzed by BD FACSuite™ software (BD, Allschwil, Switzerland). For cell cycle analysis, the cells were fixed, permeabilized with ice-cold 70% ethanol, washed, RNA was digested with RNase A (Gibco), and DNA was stained with PI (Sigma-Aldrich).

結果 (繁體中文) 1:

將細胞在96孔板中，並使之在完全培養基中恢復24小時接種，並然後暴露於TG02急性72小時的生長抑制測定法（高接種密度）或克隆生存（低接種密度）的評估。代謝活性通過3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物（MTT）測定法（Sigma）進行測定。這是先前CON組fi Rmed指重新FL ECT菌落或在72小時的治療性細胞死亡的誘導spheres.24的號碼是由膜聯蛋白V進行評估（AnxV）和碘化丙啶（PI）（BD PharMingen公司和西格瑪）溢流流式細胞術。星形孢菌素誘導的細胞凋亡被用作陽性對照。熒光每個條件被記錄在BD FACSuite™（BD Biosciences）中溢流儀和通過BD FACSuite™軟件（BD，Allschwil的，瑞士）進行分析。對於細胞週期分析，將細胞固定成本，

結果 (繁體中文) 2:

細胞在96孔板中播種，允許在完全介質中恢復24小時，然後暴露于TG02進行急性72小時生長抑制測定（高播種密度）或評估致凝生存（低播種密度）。通過3-（4，5-二甲基硫磷-2-yl）2，5-二苯基四甲二甲苯溴化（MTT）測定（西格瑪）測量代謝活性。它先前被證實反映菌落或球體的數量。 24 在72小時治療時誘導細胞死亡，通過附件五（AnxV）和碘化鈉（PI）（BD PharMingen和Sigma）流動細胞測定法進行了評估。施陶羅斯波林引起的凋亡被用作陽性對照。每個情況的螢光記錄在BD FACSuite™（BD生物科學）流細胞儀中，並由BD FACSuite™軟體（BD，瑞士Allschwil）進行分析。在細胞週期分析中，細胞固定，用冰冷的70%乙醇滲透，洗滌，RNA用RNase A（Gibco）消化，DNA被PI（西格瑪-阿爾德里希）染色。

結果 (繁體中文) 3:

將細胞接種於96孔板中，在完全培養基中恢復24小時，然後暴露於TG02進行急性72小時生長抑制試驗（高播種密度）或評估尅隆形成存活率（低播種密度）。用3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）2,5-二苯基四唑溴（MTT）法測定代謝活性。它以前被證實能反映菌落或球體的數量。24用annexin V（AnxV）和碘化丙啶（PI）（BD-PharMingen和Sigma）流式細胞術評估72h治療誘導的細胞死亡。以Staurosporine誘導的細胞凋亡為陽性對照。在BD-FACSuite™（BD Biosciences）流式細胞儀中記錄每個條件的螢光，並用BD-FACSuite™軟件（BD，Allschwil，瑞士）進行分析。為了進行細胞週期分析，細胞被固定，用70%的冰冷乙醇滲透，洗滌，RNA被RNase A（Gibco）消化，DNA被PI（Sigma-Aldrich）染色。