AbstractHuman growth hormone (hGH)

Abstract
Human growth hormone (hGH) was one of the first recombinant proteins approved for the treatment of human growth disorders. Its small size (191 amino acids), possession of only 2 disulphide bonds and absence of posttranslational modifications make Escherichia coli the host of choice for its production on any scale. In this work, we have utilized an efficient T7 based expression system to produce high levels of soluble thioredoxin-hGH (Trx-hGH) fusion protein. We outline a relatively simple three step purification process employing two immobilized metal-affinity chromatography and one anion-exchange steps and removal of fusion partner by enterokinase cleavage yielding native hGH. The ability of cell populations to produce quantities of up to 1 g/L of the soluble Trx-hGH fusion protein has been tested in flask cultivations as well as in batch and fed-batch bioreactor runs. The sequence and structure of derived hGH were confirmed by mass spectrometry and circular dichroism and its native function, to induce cell proliferation, was confirmed by employing a Nb2 cell line proliferation assay.

結果 (中文) 1:

摘要人类生长荷尔蒙 (hGH) 是第一次的重组蛋白，批准用于治疗人体生长障碍之一。其体积小 （191 个氨基酸组成)，拥有仅 2 对二硫键和翻译后修饰缺席使大肠埃希氏大肠杆菌主机选择为其生产的任何规模。在这个工作中，我们利用高效的基于 T7 表达系统，以产生高水平的可溶性硫氧还蛋白-hGH （Trx hGH） 融合蛋白。我们概述由肠激酶乳沟屈服本机 hGH 雇用两种固定化的金属亲和层析和一个阴离子交换步骤和拆卸的融合伙伴的相对简单的三步纯化工艺。细胞群体生产数量达 1 g/l 的可溶性 Trx hGH 融合蛋白的能力已在瓶培养以及批量测试和补料分批反应器运行。质谱法测定证实了序列和结构派生的生长激素和圆二色性和其本机功能，诱导细胞增殖，证实采用 Nb2 细胞线扩散法检测。

結果 (中文) 3:

摘要
人类生长激素（HGH）是第一个批准用于人类重组蛋白的生长障碍的治疗。它的小尺寸（191个氨基酸），只有2个二硫键和翻译后修饰，使大肠杆菌不占有任何规模的生产选择的宿主。在这项工作中，我们利用一个高效的T7表达系统产生高水平的可溶性蛋白（Trx融合蛋白的生长激素HGH）。我们勾勒出一个相对简单的三步纯化工艺采用固定化金属亲和层析和阴离子交换步骤，通过肠激酶切割得到天然生长激素去除融合伴侣。细胞群体产生高达1 g/L可溶性蛋白生长激素融合蛋白数量的能力已经过测试，在摇瓶培养和分批补料分批生物反应器运行。序列和衍生的hGH结构通过质谱和圆二色性和其原生功能证实，诱导细胞的增殖，采用NB2细胞增殖实验证实。