PrA activity was assayed by a fluor

PrA activity was assayed by a fluorescent method (Kondo et al.,1999). One unit of PrA will hydrolyze 1 mg of insulin chain B (oxidized)per minute at pH 6.0 (25 C). Biogenic amines and amino acids were determined by a liquid chromatographic method as described by Lu et al. (2007) and Gómez-Alonso, Hermosín-Gutiérrez, and García-Romero (2007) with some modified. Briefly,1 mL rice wine sample and 200 lL NaHCO3 saturated solution,20 lL NaOH solution (2 M), 2 mL dansyl chloride (10 mg/mL) were mixed, and the mixture was incubated in a water bath at 70 C for 10 min, then 1 mL ammonia water (50 mg ammonia dissolved in water) was added to terminate the reaction. After centrifugation at 3000 rpm for 10 min, the supernatant were filtered by 45 lm filter,then the sample was analyzed by HPLC (Agilent 1100 series equipped with diode array detector, Waters-Atlantisd C18(46  250 mm, 5 lm)). The C18 column was equilibrated at 30 C with a mobile phase consisting of 55% methanol and 45% water.For amino acids determined, 1 mL rice wine sample, 1.75 mL of borate buffer 1 M (pH 9), 750 lL of methanol, 1 mL of target sample without any pretreatment, 20 lL of internal standard (L-2-aminoadipic acid, 1 g/L), and 30 lL of DEEMM were mixed in a screwcap test tube over 30 min in an ultrasound bath. The mixture was then heated at 70 C for 2 h. The Agilent 1100 series equipped with array photodiode detector, Waters-Atlantisd C18 (46  250 mm,5 lm) was used. The analyses were performed in triplicate. A gradient elution system with a mixture of A (25 mM acetate buffer pH = 5.8 with 0.02% sodium azide) and B (80:20 mixture of acetonitrile
and methanol) was used.

結果 (中文) 1:

PrA 活性测定荧光法 (近藤 et al.，1999年)。一个单位的 PrA 将水解 1 毫克的胰岛素链 B (氧化) 每分钟在 pH 6.0 (25 ℃)。生物胺和氨基酸含量测定液相色谱法所述路等人 (2007 年) 和戈麦斯 Alonso，Hermosín-Gutiérrez，García Romero (2007 年) 与一些修改。简单地说，1 毫升黄酒样品和 200 lL NaHCO3 饱和溶液，20 lL NaOH 溶液 (2 米)，混合 2 毫升丹磺酰氯 (10 毫克/毫升)，然后混合培养在 10 分钟内，在 70 ℃ 水浴中，1 毫升氨水 (50 毫克氨溶解在水中) 被添加以终止反应。离心法在 3000 rpm，10 分钟上, 清液过滤 45 lm，筛选器之后，样品 hplc (安捷伦 1100年系列配备二极管阵列检测器，水域 Atlantisd C18(46 250 mm, 5 lm)) 进行了分析。C18 柱是 55%甲醇和 45%的水组成的流动相平衡在 30 ℃。为确定氨基酸，1 毫升黄酒样品，1.75 毫升的硼酸盐缓冲 1 M (pH 9)，750 lL 甲醇、 1 毫升的目标样本没有任何预处理，20 的内部标准 (L-2-氨基己二酸，1 g/L)，我会和 30 lL DEEMM 喜忧参半试管瓶盖超声浴中超过 30 分钟。在 70 ℃ 2 小时然后加热混合物。安捷伦 1100年系列配备光电二极管阵列检测器，水域 Atlantisd C18 (46 250 毫米，5 lm) 被使用。一式三份，进行了分析。与混合的梯度洗脱系统 (25 毫米醋酸缓冲 pH = 5.8 0.02%叠氮钠) 和 B (80: 20 混合物的乙腈和甲醇) 被使用。

結果 (中文) 3:

通过荧光法测定PRA活性（Kondo等人，1999）。一个单位的PRA将水解胰岛素B链1毫克（氧化）每分钟在pH值为6（25℃）。生物胺和氨基酸的测定由液相色谱法所描述的鲁等。（2007）和Gó梅茨阿隆索海默ín-gutié口号，和加西亚ía-romero（2007）一些修正。简而言之，米酒1毫升样品和200将碳酸氢钠饱和溶液，20将NaOH溶液（2米），2毫升的丹磺酰氯（10毫克/毫升）混合和混合培养在70℃水浴中10分钟，然后1毫升氨水（50毫克氨溶于水）加入终止反应。在3000 rpm离心10 min后，取上清液45 LM滤波器滤波，然后进行HPLC分析样品（配备二极管阵列检测器，Agilent 1100系列水atlantisd C18（46，250毫米，5流明））。C18柱平衡在30 C与流动相组成的55%甲醇和45%的水。氨基酸测定，1毫升黄酒样品，1.75毫升的硼酸盐缓冲液（pH 9），1米750将甲醇，1毫升的目标样品未经任何预处理，内部标准将20（l-2-aminoadipic酸、1 g/L），并将30 deemm混合在一个螺旋塞的试管30分钟以上超声波浴。然后将混合物加热到70 C 2小时安捷伦1100系列配备阵列光电探测器，水atlantisd C18（46 250毫米，采用5流明）。进行分析，一式三份。一个混合梯度洗脱系统（25毫米醋酸缓冲液pH值为5.8和0.02%的叠氮钠）和B（80:20乙腈和甲醇）。